乳酸杆菌对LPS诱导THP-1细胞炎症性细胞因子释放的调节作用及可能机制

发布时间：2018-01-06 14:27

  本文关键词：乳酸杆菌对LPS诱导THP-1细胞炎症性细胞因子释放的调节作用及可能机制　出处：《南京医科大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：背景:乳酸杆菌(Lactic Acid Bacteria)属于肠道正常菌群,参与维持肠道微生态的平衡及调节机体免疫应答。越来越多的研究发现,乳酸杆菌作为一种益生菌,具有多种免疫调节活性。它能够增强NK细胞的杀伤活性、促进IgA的分泌、促进DC的成熟、调节性T细胞的分化和缓解炎症等。此外,乳酸杆菌的细胞成分脂磷壁酸(LTA)、肽聚糖(PGN)、脂蛋白(LP)可以通过结合TLR2介导细胞对乳酸杆菌的识别,而TLR2能够分别与TLR1、TLR6结合形成异源二聚体,介导其对丙酰基LP、乙酰基LP的识别,可能参与了乳酸杆菌刺激THP-1细胞的复杂的信号转导过程。然而,乳酸杆菌发挥免疫调节作用的分子机制目前尚不明确。 目的:观察副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei,L.para)与嗜酸性乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus,L.acid)对LPS诱导THP-1细胞分泌TNF-α、IL-12P40、TGF-β的调节作用,并初步探讨其分子机制。 方法:(1)先将THP-1细胞在佛波酯(PMA)的刺激作用下活化、分化为巨噬细胞样细胞,再进行LPS诱生炎性细胞因子实验。实验分为空白对照组、LPS处理组、单独L.para处理组、L.para与LPS共处理组、单独L.acid处理组及L.acid与LPS共处理组。提取上述各实验组细胞的RNA组分,以RT-PCR法检测THP-1细胞TNF-αmRNA水平的表达,同时,以ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-12P40和TGF-β水平的变化。(2)提取空白对照组、LPS处理组、单独L.para处理组、L.para与LPS共处理组、单独L.acid处理组及L.acid与LPS共处理组细胞的全蛋白,以Western Blot方法检测胞内未磷酸化及磷酸化IκB-α蛋白水平的表达。(3)细胞免疫荧光技术观察NF-κB/P65的亚细胞定位,同时,TransAM核蛋白定量分析法检测THP-1细胞核内NF-κB(P65/P50)的水平。 结果:(1)LPS能显著刺激PMA诱导分化的THP-1细胞分泌炎性细胞因子TNF-α、IL-12P40和TGF-β;乳酸杆菌L.para及L.acid单独作用时也能诱导细胞因子TNF-α和IL-12P40的产生,但L.para诱导的水平较低,而L.acid诱导的水平与LPS诱导水平相似,两种乳酸杆菌对TGF-β的诱导水平则均显著高于LPS;而当两菌分别与LPS共同作用于PMA诱导分化的THP-1细胞时,都能显著抑制LPS刺激细胞诱生的TNF-α和IL-12P40,并以L.para的抑制作用更明显,但两种细菌均对TGF-β没有抑制作用,反而进一步促进其分泌。(2)LPS、L.para及L.acid单独作用时,均能使PMA诱导分化的THP-1细胞胞核磷酸化IκBα(p-IκBα)的水平增高、非磷酸化IκB-α水平降低,但L. para的作用相对较弱;而当L.para或L.acid与LPS共同作用时,则显著抑制LPS刺激所诱导的IκB-α的磷酸化。(3)LPS、L.para及L.acid单独作用时,均能使PMA诱导分化的THP-1细胞核内NF-κB(P65/P50)的水平增高,但L. para的作用相对较弱;而当L.para或L.acid与LPS共同作用时,则显著抑制LPS刺激所诱导的NF-κB的核转位作用。 结论:乳酸杆菌L. para、L.acid分别与LPS共同作用时,均能通过抑制LPS刺激细胞所诱生的炎性细胞因子TNF-α、IL-12P40的水平而发挥炎症调节作用,这一抑制作用的机制涉及抑制NF-κB信号通路。而且,乳酸杆菌的这一作用在不同菌种之间存在明显差异。所以,L.para与L.acid的应用对于预防溃疡性结肠炎、Crohn’s肠病等炎症性疾病的发生或缓解患者的炎症状况具有一定的临床意义。
[Abstract]:Background : Lactic acid bacterium belongs to the normal flora of intestinal tract , participates in maintaining the balance of intestinal microecology and regulates the immune response of organism . More and more research has found that Lactobacillus is used as a kind of probiotics . It can enhance the killing activity of NK cells , promote the secretion of IgA , promote the maturation of DC , regulate T cell differentiation and alleviate inflammation . Objective : To observe the effect of Lactobacillus acidophilus ( L . para ) and Lactobacillus acidophilus ( L . acid ) on the secretion of TNF - 伪 , IL - 12P40 and TGF - 尾 in THP - 1 cells induced by LPS . Methods : ( 1 ) The expression of TNF - 伪 , IL - 12P40 and TGF - 尾 in the supernatant of THP - 1 cells was detected by ELISA . The expression of TNF - 伪 , IL - 12P40 and TGF - 尾 in the supernatant of THP - 1 cells was detected by RT - PCR . Results : ( 1 ) The levels of TNF - 伪 , IL - 12P40 and TGF - 尾 in THP - 1 cells induced by PMA were significantly inhibited by LPS . Conclusion : L . para and L . acid can play an important role in inhibiting the level of inflammatory cytokines TNF - 伪 , IL - 12P40 induced by LPS - stimulated cells .

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R371

【共引文献】

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本文编号：1388266