CD107α表达对NK细胞与细胞毒性T细胞细胞毒功能缺陷性疾病筛查价值探讨

  目的：1、建立自然杀伤性细胞及细胞毒性T细胞表面溶酶体相关膜蛋白质1（LAMP-1，CD107α）表达流式细胞术检测方法；2、探讨其对自然杀伤性（NK）细胞与细胞毒性T淋巴细胞（CTL）细胞毒功能及相关性疾病的筛查价值。方法:收集疑诊Chediak-Higashi综合征（Chediak-HigashiSyndrome，CHS）患儿3例、噬血淋巴组织细胞增生症（HLH）患儿3例及10例健康对照儿童外周血，提取外周血DNA及RNA，PCR或RT-PCR扩增目的基因，测序分析基因背景。外周血单个核细胞（PBMC）以重组人白介素受体2（IL-2）刺激过夜，再以植物凝集素（PHA）或T细胞刺激剂Anti-CD3活化刺激细胞2h后，流式细胞术分析NK细胞及CTL CD107α表达频率及强度。结果：10例健康儿童PBMC刺激前后NK细胞[（0.27±0.07）%vs.（5.80±2.83）%，P<0.05]及CTL[（0.18±0.07）%vs.（4.47±2.36）%，P<0.05]表面CD107α表达频率均显著升高，其平均荧光强度（MFI）亦显著升高。与10例正常儿童比较，3例疑似CHS患儿外周血PBMC经Anti-CD3活化后CTL表面CD107α表达无明显上升（0.3%、0.9%、0.2%）,对照组（4.47±2.36）%；PHA刺激后两例患儿NK细胞表面CD107α表达频率亦无明显变化（0.5%、0.6%），对照组（5.80±2.83）%，其MFI变化趋势与CD107α表达率类似。3例HLH患儿NK细胞（3.3%、4.1%、2.7%），对照组（5.80±2.83）%；CTL（2.8%、1.7%、1.9%），对照组（4.47±2.36）%；表面CD107α刺激前后其表达频率及MFI与正常对照组差异无统计学意义。3例疑似CHS患儿中两例患儿LYST基因突变分别为（c.5411-5414del TTTC，L1741fsX1758和c.7975C>T，R2596X）和（c.4863G>A, R1563H和c.5392-5393delAA, E1739fsX1756），确诊为CHS综合征，另一例基因诊断尚未明确。3例HLH患儿PRF、MUNC13-4及STX11基因检查结果均未发现突变。结论：成功建立CD107α表达流式细胞检测方法，并在CHS中验证，该方法可能用作细胞毒功能的筛查方法，为后续基因确诊及发现新的致病基因奠定基础。

 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

 

【文章页数】：54 页

 

【学位级别】：硕士

 

文章目录

英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

参考文献

全文总结

文献综述

    参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文

 

 

参考文献

 

国际期刊论文

 

[1]Retention of viability, cytotoxicity, and response to IL‐2, IL‐15, or IFN‐α by human NK cells after CD107a degranulation[J] . Costin Tomescu,Jihed Chehimi,Vernon C. Maino,Luis J. Montaner.  Journal of Leukocyte Biology . 2009 (5)

[2]A novel multiparametric flow cytometry-based cytotoxicity assay simultaneously immunophenotypes effector cells: Comparisons to a 4 h 51 Cr-release assay[J] . G.G. Kim,V.S. Donnenberg,A.D. Donnenberg,W. Gooding,T.L. Whiteside.  Journal of Immunological Methods . 2007 (1)

[3]Roles of LAMP-1 and LAMP-2 in lysosome biogenesis and autophagy[J] . Eeva-Liisa Eskelinen.  Molecular Aspects of Medicine . 2006 (5)

[4]LiveCount Assay: Concomitant measurement of cytolytic activity and phenotypic characterisation of CD8 + T-cells by flow cytometry[J] . Estelle Devêvre,Pedro Romero,Yolanda D. Mahnke.  Journal of Immunological Methods . 2006 (1)

[5]Ex vivo analysis of T-cell function[J] . Maria A Suni,Vernon C Maino,Holden T Maecker.  Current Opinion in Immunology . 2005 (4)

[6]The role of tumor stroma in the interaction between tumor and immune system[J] . Thomas Blankenstein.  Current Opinion in Immunology . 2005 (2)

[7]A sensitive flow cytometry-based cytotoxic T-lymphocyte assay through detection of cleaved caspase 3 in target cells[J] . Liwei He,Jalil Hakimi,Danielle Salha,Ioana Miron,Pamela Dunn,Laszlo Radvanyi.  Journal of Immunological Methods . 2005 (1)

[8]CD107a as a functional marker for the identification of natural killer cell activity[J] . Galit Alter,Jessica M. Malenfant,Marcus Altfeld.  Journal of Immunological Methods . 2004 (1)

[9]A novel flow cytometric assay focusing on perforin release mechanisms of cytotoxic T lymphocytes[J] . Andrea Weren,Bernd Bonnekoh,Burkhart Schraven,Harald Gollnick,Andreas Ambach.  Journal of Immunological Methods . 2004 (1)

[10]Detection of T-Cell Degranulation: CD107a and b[J] . Michael R. Betts,Richard A. Koup.  Methods in Cell Biology . 2004