多功能p100蛋白对细胞周期的调控机制研究

发布时间：2018-01-12 08:02

  本文关键词：多功能p100蛋白对细胞周期的调控机制研究　出处：《天津医科大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：研究目的：细胞周期是细胞生命活动的基本特征。细胞通过周期时相的变迁完成个体的发育和自我的更新,其核心内容为DNA的复制以及相关蛋白时序性的转录表达。p100蛋白是一种多功能蛋白,不但可以作为转录共激活因子,与若干转录因子相互作用激活转录；在转录后的调控中,p100蛋白通过参与pre-mRNA剪接,RNAi等环节发挥重要作用；p100蛋白还与和细胞周期密切相关的核仁存在共定位现象；另外,在一些临床疾病的研究中,发现p100在肿瘤的发生发展中扮演重要角色。鉴于两者均与基因转录、pre-mRNA剪接加工、核仁以及肿瘤的发生密切相关,我们推测p100蛋白有可能参与细胞周期的调控,从而对细胞的生物学行为产生影响。本文旨在研究p100对细胞周期的影响,进而探讨其调控细胞周期的分子机制。 方法：本课题分三部分进行,第一部分研究不同细胞群中p100的表达。该部分主要从两方面研究,一方面,采用细胞分离技术,于白膜中分离淋巴细胞和粒细胞,检测两种细胞群中p100的表达情况；另一方面,取不同的组织,观察不同增殖能力的细胞群间p100的表达差异。第二部分,改变p100的表达水平,研究p100对细胞周期分布及同步化释放后再分布的影响,同时检测细胞周期调控网络中其他周期蛋白的变化,探讨其调控细胞周期的分子机制。第三部分,采用细胞同步化技术,研究p100在不同细胞周期的特点。该部分主要从三方面研究,第一通过WB与PCR技术检测p100在不同周期时相的表达；第二采用免疫沉淀技术,检测不同周期p100蛋白的修饰；第三采用免疫荧光技术观察不同周期p100的胞内定位。 结果：①淋巴细胞中p100高表达,粒细胞中p100低表达； ②增殖细胞群(G1期细胞)肿瘤细胞中,p100高表达；暂不增殖细胞群(GO期细胞)肝、脾、肾组织中,p100高表达；终末细胞群粒细胞、肌细胞、神经组织中,p100低表达。 ③抑制p100表达,G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低；过表达p100,G1期细胞比例降低,S期细胞比例增加。 ④抑制p100表达,将细胞由G1/S交界期及G2/M期释放,与对照组及过表达组相比,细胞重新进入细胞周期的速度减慢。 ⑤将细胞同步化于不同周期,发现p100蛋白可表达于细胞周期各个阶段,以G1/S期表达水平较低； ⑥通过免疫沉淀富集p100蛋白,检测其磷酸化水平,结果显示当细胞阻滞于G1/S期,p100蛋白磷酸化水平明显降低。 ⑦免疫荧光观察,p100蛋白在不同周期状态下的分布呈现动态变化,与核仁在细胞周期的分布相一致。 结论：①在细胞周期活跃的细胞群中,p100高表达；在终末期细胞群中,p100低表达。说明p100蛋白与细胞周期特性密切相关。 ②p100蛋白可促进细胞周期进程,且主要是促进G1期向S期的周期进程。 ③p100蛋白可表达于细胞周期各个阶段,以G1/S期表达水平较低,且磷酸化水平明显降低。进一步说明p100对细胞周期的调控发生在G1/S期,提示p100可能通过磷酸化状态的改变发挥作用。 ④p100蛋白在不同周期时相的分布呈动态变化,与核仁的周期分布相一致。提示p100蛋白可能与核仁协同作用参与核糖体的形成,调控细胞周期。
[Abstract]:Research purposes : The cell cycle is the basic feature of cell life activities . The development and self - renewal of the individual is accomplished by the change of phase in the cycle . The core content of p100 protein plays an important role in the replication of DNA and the transcriptional expression of related proteins . In the post - transcriptional regulation , p100 protein plays an important role in the development of tumor . In addition , in the study of transcriptional regulation , p100 protein plays an important role in the development of tumor . In addition , it is speculated that p100 protein may participate in the regulation of cell cycle , thus affecting the biological behavior of the cell . The purpose of this paper is to study the effect of p100 on cell cycle and to further explore its molecular mechanism for regulating cell cycle . Methods : The expression of p100 in different cell populations was studied in the first part . On the one hand , the expression of p100 in different cell populations was studied by means of cell separation technique . On the other hand , the expression level of p100 was detected by means of cell separation technique . Results : 鈶，

本文编号：1413364