悬浮组织块法分离培养SD大鼠脂肪干细胞的实验研究

发布时间：2018-01-12 17:27

  本文关键词：悬浮组织块法分离培养SD大鼠脂肪干细胞的实验研究　出处：《中国免疫学杂志》2017年08期 　论文类型：期刊论文

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【摘要】：目的:建立SD大鼠脂肪干细胞悬浮组织块分离培养法。方法:取正常SD大鼠股沟处脂肪组织,用悬浮组织块法和组织块贴壁法分离培养SD大鼠脂肪干细胞,观察细胞的生长状况及形态特征。取第3代对数期细胞,CCK-8法绘制其生长曲线;免疫荧光法检测其表面抗原CD29、CD44、CD45的表达情况;分别用成脂、成骨诱导培养液进行诱导分化,油红O、茜素红染色定性鉴定。结果:两种方法体外培养得到的SD大鼠脂肪干细胞形态为梭形纤维样,生长力旺盛,生长曲线为典型的"S"型;免疫荧光法检测显示第3代细胞强表达CD29、CD44,CD45表达阴性;细胞成脂诱导培养14 d后,油红O染色为阳性;成骨诱导培养14 d后,茜素红染色为阳性。结论:悬浮组织块法可以分离培养出SD大鼠脂肪干细胞,方法简便,为体外分离培养SD大鼠脂肪干细胞提供了一种新的方法。
[Abstract]:Objective: to establish a method for the isolation and culture of adipose stem cell suspension tissue mass in SD rats. Methods: the fat tissue in the groin of normal SD rats was obtained. Sprague-Dawley adipose stem cells were isolated and cultured by suspension tissue block method and tissue mass adherence method, and the growth status and morphological characteristics of the cells were observed. The growth curve was drawn by CCK-8 method in the logarithmic phase of the third generation. Immunofluorescence assay was used to detect the expression of CD29, CD4, CD4 and CD45. The adipose stem cells of SD rats were identified qualitatively by oil red O and alizarin red staining. Results: the morphology of adipose stem cells of SD rats in vitro was fusiform fiber like. The growth curve is typical "S" type. Immunofluorescence assay showed that the expression of CD29, CD44and CD45 was negative in the third generation cells. Oil red O staining was positive after 14 days of lipogenic culture. After 14 days of osteogenic induction, alizarin red staining was positive. Conclusion: the method of suspension tissue mass can isolate and culture SD rat adipose stem cells, and the method is simple and convenient. It provides a new method for isolation and culture of adipose stem cells from SD rats in vitro.
【作者单位】： 中国人民解放军武汉总医院医学实验科;
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 脂肪组织是成体间充质干细胞的重要来源之一,其提供的间充质干细胞数量远大于其他组织来源。脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ASCs)具有良好的增殖能力和自我更新能力,在合适的条件下能够分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经细胞、内皮细胞等,在基础医学研究领域

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本文编号：1415242