Cr（Ⅵ）对L-02肝细胞线粒体呼吸链复合体的影响

发布时间：2018-01-14 06:25

  本文关键词：Cr（Ⅵ）对L-02肝细胞线粒体呼吸链复合体的影响　出处：《中南大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的： 探讨Cr(VI)对L-02肝细胞线粒体DNA编码呼吸链复合体亚基基因的表达水平、呼吸链复合体活性与能量代谢的影响以及它们的相互联系,为进一步探索Cr(VI)所致线粒体能量代谢障碍的分子机制提供实验依据。 方法： 用不同浓度Cr(VI)(0、2、4、8、16、32、64、128μmol/L)分别处理体外培养的人胚L-02肝细胞24h后,通过MTT试验检测不同浓度Cr(VI)对L-02肝细胞存活率的影响,选择低、中、高3个Cr(VI)处理浓度,即2、8、32μmol/L进行后续实验,处理时间为24h。用细胞总RNA提取试剂盒分离肝细胞总RNA,线粒体ND1、ND2、Cytb、 COXⅠ-Ⅲ、ATPase6和ATPase8基因表达水平用逆转录-荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定；细胞ATP含量、线粒体呼吸链复合体Ⅰ-V活性与细胞ROS含量分别用化学发光法、紫外分光光度法和荧光分光光度法检测。 结果： 1.Cr(Ⅵ)引起L-02肝细胞生存率降低：Cr(Ⅵ)在2-128gmol/L浓度范围内,可引起肝细胞存活率显著降低(P0.05)。Cr(Ⅵ)对细胞生存率的影响表现出明显的剂量-效应关系,肝细胞生存率与Cr(Ⅵ)处理浓度呈显著负相关关系(r=-0.888,P0.05)。 2.Cr(Ⅵ)诱导肝细胞ROS生成增多：各Cr(Ⅵ)处理组肝细胞内ROS含量增高,其中8、32μmol/LCr(Ⅵ)处理组与对照组相比差异有统计学意义P0.05)。Cr(Ⅵ)处理浓度与肝细胞内ROS水平之间存在明显正相关关系(r=0.993,P0.05)。 3. Cr(Ⅵ)对线粒体DNA基因表达的影响2μmol/LCr(Ⅵ)可增强Ctyb、ATPase6和ATPase8基因的表达,下调ND2基因表达P0.05)；8μmol/LCr(Ⅵ)上调ND1、ND2、Cytb、COX Ⅰ和COXⅢ基因的表达,而引起ATPase6和ATPase8基因表达减弱(P0.05)；32μmol/LCr(Ⅵ)可引起ND1、ND2、COX Ⅰ-Ⅲ基因表达增强,而使ATPase6和ATPase8基因表达下降(P0.05)。 4. Cr(Ⅵ)对呼吸链复合体活性的影响：2、8、32μmo1/LCr(Ⅵ)染毒处理,均可使呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性显著下降(P0.05)；各Cr(Ⅵ)处理组复合体Ⅱ活性的降低与对照组相比没有统计学意义(P0.05)。 5. Cr(Ⅵ)对肝细胞内ATP含量的影响：与对照组相比,各浓度Cr(Ⅵ)处理组肝细胞内ATP含量均显著降低(P0.05)。 结论： Cr(Ⅵ)引发的肝细胞内ROS的产生与线粒体DNA编码的呼吸链复合体亚基基因表达改变有关。线粒体DNA中呼吸链复合体亚基编码基因的表达水平与复合体Ⅰ-Ⅴ活性关系密切。线粒体DNA基因表达水平改变,导致线粒体呼吸链复合体Ⅰ-Ⅴ活性下降,可能是Cr(Ⅵ)诱导肝细胞线粒体能量代谢障碍的原因之一。
[Abstract]:Objective: To investigate the expression level of mitochondrial DNA coding respiratory chain complex subunit gene in L-02 hepatocytes, the effects of CrVI on the activity of respiratory chain complex and energy metabolism, and their correlation. It provides experimental basis for further exploring the molecular mechanism of mitochondrial energy metabolism disorder induced by CrVI. Methods: Human embryo L-02 hepatocytes were cultured in vitro for 24 hours. The survival rate of L-02 hepatocytes was determined by MTT test. 32 渭 mol/L was followed up for 24 h. Total RNA was isolated from hepatocytes with total RNA extraction kit, mitochondrial ND1, ND2Cytb, COX 鈪，

本文编号：1422430