siRNA干预树突状细胞CD40分子表达的实验研究

发布时间：2018-01-14 16:42

  本文关键词：siRNA干预树突状细胞CD40分子表达的实验研究　出处：《吉林大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：树突状细胞CD40是相对分子质量为4800~50000的I型跨膜磷酸化的糖蛋白，其基因定位于20q11-20q13-2。是主要表达在B细胞、单核巨噬细胞、DCs和少数成纤维细胞上的辅助信号分子，参与了细胞和体液免疫反应。其配体CD40L相对分子质量约39000，为Ⅱ型跨膜转运蛋白，两者同属于TNF受体超家族成员，这一对受体 配体相互作用是免疫细胞间重要的信号转导途径。结合后可诱导各种淋巴细胞激活并产生各种促炎症因子（如：IL-1、IL-2、IFN-γ和INF-α等），吸引白细胞血管外浸润，引起局部组织损伤和功能障碍。研究表明CD40与CD40L协同刺激信号在免疫应答的启动和放大中起着重要作用，其与感染及免疫相关性疾病的发生发展密切相关。设计特异性分子去阻断CD40或CD40L的相互作用，使T细胞产生免疫耐受，，B细胞分泌炎症因子减少，阻止疾病发生、发展，特别是炎症严重时作用尤为明显。动物模型已经得到证实，给予CD40L的抗体对有着自身免疫和炎症疾病的小鼠有效，包括慢性胶原诱导的关节炎、肺炎、纤维变性、实验性变应性脑脊髓炎、狼疮肾炎、动脉粥样硬化、急性胰腺炎及卵巢炎等；通过CD40L抗体在半抗原诱导的鼠结肠炎模型及其他实验性和感染后结肠炎模型中均能证实CD40/CD40L系统在炎症性肠病（IBD）发生发展中重要性。RNA干预（RNA-mediated interference，RNAi）在疾病治疗中的应用是当前研究的热点之一。其基本原理为被特异地切割成为长度为19~21nt的小干扰RNA （small interfering RNA，siRNA），可作为导向序列，引导其反应与单链靶mRNA结合，共同形成RNA诱导的沉默复合物（RNAinduced silencing complex，RNSC）。目前RNAi技术的研究日趋深入，在医学领域应用的非常广泛，包括抗病毒、肿瘤的治疗及神经变性性疾病的治疗上都取得了较好的效果。然而应用siRNA干预树突状细胞CD40分子表达治疗炎症性肠的相关报道较少。本研究将设计好的针对CD40分子正义及反义RNAi片段与pSilencer连接，构建表达载体，经DH5α扩增后测序证明为pSilencer-P450-CD40RNAi，，再转染SD大鼠DC，通过蛋白免疫印记、PCR等方法，测定大鼠DC表面CD40分子及CD40mRNA的表达水平，结果显示干预组明显降低树突状细胞中CD40分子的蛋白表达，灰度扫描结果抑制率达60％；CD40分子的mRNA表达量下调了57.21％，差异具有统计学意义(P0.05)。这一结果为IBD RNA干预治疗的动物实验及临床应用奠定了实验基础。
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本文编号：1424448