小G蛋白Rab5对表达在HEK293细胞上的大电导钙激活钾通道的影响

发布时间：2018-01-28 13:37

  本文关键词： 小G蛋白家族 大电导钙激活钾通道 蛋白转运 基因转染　出处：《山东医药》2017年08期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的探讨小G蛋白Rab5对HEK293细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的影响。方法将对数生长期HEK293细胞,随机分为Control组、Rab5WT组、Rab5CA组和Rab5DN组。采用脂质体转染法进行转染,Control组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和对照质粒pc DNA3.1,Rab5WT组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5WT质粒,Rab5CA组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5CA质粒,Rab5DN组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5DN质粒,每组两种质粒总量为4μg,按质量比1∶1共转染至3.5 mm培养皿中。转染72 h、荧光显微镜下观察转染效率在70%以上时,采用膜片钳、Western blotting法和流式细胞术观察Rab5对HEK293细胞BKCa的作用。结果与Control组比较,Rab5WT组、Rab5CA组BKCa全细胞电流密度明显增加,而Rab5DN组明显降低;Rab5WT组、Rab5CA组BKCa膜蛋白的相对表达量明显升高,而Rab5DN组明显降低(P均0.05);Rab5WT组、Rab5CA组Flag+/GFP+明显增加,而Rab5DN组明显降低(P均0.05)。结论 Rab5能够明显增加表达在HEK293细胞上的BKCa电流及细胞膜上的表达,并可促进BKCa向质膜的转运过程。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of small G protein Rab5 on large conductance calcium activated potassium channel (BK Ca) in HEK293 cells. Methods HEK293 cells in logarithmic phase were randomly divided into Control group. Rab5WT group, Rab5CA group and Rab5DN group were transfected by liposome transfection. Flag-h Slo1-GFP plasmid and control plasmid PC DNA3.1 were transfected into Control group. Flag-h Slo1-GFP plasmid and Rab5WT plasmid were transfected into Rab5WT group. Flag-h Slo1-GFP plasmid and Rab5CA plasmid were transfected into Rab5CA group. Flag-h Slo1-GFP plasmid and Rab5DN plasmid were transfected into Rab5DN group, and the total amount of two kinds of plasmids in each group was 4 渭 g. When the transfection efficiency was more than 70% under fluorescence microscope for 72 h, the patch clamp was used when the transfection was carried out in 3.5mm petri dish at the mass ratio of 1: 1. The effect of Rab5 on BKCa of HEK293 cells was observed by Western blotting and flow cytometry. The whole cell current density of BKCa increased significantly in Rab5CA group, but decreased in Rab5DN group. The relative expression of BKCa membrane protein in Rab5WT group was significantly increased, while that in Rab5DN group was significantly lower than that in Rab5DN group. In Rab5WT group, Flag / GFP increased significantly in Rab5CA group. Conclusion Rab5 can significantly increase the expression of BKCa current and cell membrane in HEK293 cells. It can promote the transport of BKCa to plasma membrane.
【作者单位】： 西南医科大学附属医院;西南医科大学心血管医学研究所;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31300948)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 大电导钙激活钾通道(BKCa)是血管平滑肌细胞膜上重要的离子通道,可携带70%~80%的外向电流,在调节血管张力和血压中发挥重要作用[1]。我们前期研究发现,BKCa是众多舒血管药物的作用靶点,其功能活动异常与高血压等密切相关[2,3]。BKCa蛋白在内质网合成、高尔基体加工后,需经过一

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本文编号：1470917