支持细胞共培养促进神经干细胞向神经元分化和轴突生长的研究

发布时间：2018-02-12 04:02

  本文关键词： 皮层神经干细胞 支持细胞 神经白细胞素 共培养 神经元分化 神经元轴突生长　出处：《华东理工大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：睾丸组织的支持细胞(Sertoli Cell, SCs)作为一种滋养型细胞,能够分泌多种活性物质,包括生长因子、营养因子和生理调节蛋白等。同时,支持细胞在正常的生长环境中不仅能够创造出适合其他多种细胞生长发育的有利微环境(如生精细胞和神经干细胞),还能诱导胚胎皮层神经干细胞(neural stem cell, NSCs)分化并维持PTujⅢ阳性神经元生长。因此,本文对睾丸支持细胞和神经干细胞的分离、共培养条件,及神经元细胞诱导分化和轴突生长的机制进行初步研究。具体结果如下： (1)从ICR小鼠分离睾丸支持细胞,并通过苏木精伊红染色和DAPI核染色法鉴定了具有独特双核仁结构的支持细胞。 (2)采用机械法和酶消化法,从ICR胎鼠脑皮层分离了神经干细胞。通过免疫细胞化学荧光染色进行验证分离的原代胚胎皮层神经干细胞,结果显示其可形成带特异性抗原蛋白Nestin的神经球,并经传代培养后纯度达到92%(P0.05)。 (3)支持细胞与原代胚胎皮层神经干细胞共培养能有效诱导神经元分化并促进轴突生长。免疫细胞化学荧光染色分析表明在培养皿中生长的胚胎皮层神经干细胞在共培养7天后有60%(P0.05)分化为成熟的神经元。同时,共培养模式能够促进原代诱导神经元的轴突生长(在第7天时为140μm)(P0.05)和存活率(在第7天时为82%)(P0.05)。与在分化培养基中生长分化的神经元(阳性对照)相比较,其轴突的平均长度增长了43%(P0.05)而存活率提高了58%(P0.05)。 (4)实验首次发现神经白细胞素(neuroleukin)是支持细胞分泌的促进轴突生长的活性物质之一。为了验证支持细胞分泌的促进轴突生长的活性物质,通过总RNA提取和逆转录PCR验证了支持细胞表达神经白细胞素(NLK)的mRNA,并通过超高效液相串联二级质谱验证NLK存在于支持细胞上清液中。在支持细胞饲养层中外源添加抗神经白细胞素抗体后,培养到第7天时神经元轴突长度减少到了108μm,与外源添加NLK的支持细胞直接共培养条件达到的176μm相比较要少得多,所以NLK对促进轴突生长和提高神经元存活率有很大的贡献,是支持细胞分泌的一种重要活性物质。 因此,分化自皮层神经干细胞的神经元的轴突生长和神经元存活率的提高都能够由支持细胞所调节,并且发现由支持细胞分泌的神经白细胞素(neuroleukin)起到了重要作用。这不仅能够提供大量的可供移植治疗用的神经元来源,还能强化神经元之间的相互作用,从而提高移植的效率。
[Abstract]:Sertoli cell (SCS), the Sertoli cell of testicular tissue, as a trophoblast, can secrete a variety of active substances, including growth factor, nutrition factor and physiological regulatory protein. Sertoli cells can not only create a favorable microenvironment (such as spermatogenic cells and neural stem cells) suitable for the growth and development of many other cells in normal growth environment, but also induce differentiation of neural stem cells (NSCs) from embryonic cortical neural stem cells. And maintain the growth of PTuj 鈪，

本文编号：1504738