重组HBcAg激活p38MAPK信号通路增加髓源性树突状细胞IL-15的分泌

发布时间：2018-02-14 00:33

  本文关键词： 慢性乙型肝炎病毒感染 树突状细胞 乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg) 白细胞介素(IL-) p丝裂原激活蛋白激酶(pMAPK)　出处：《细胞与分子免疫学杂志》2017年03期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞(mDC)分泌白细胞介素15(IL-15)的机制。方法采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞,采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导分化为mDC,10μg/m L rhHBcAg刺激mDC 1~6 d;分别用25μmol/L磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002、1μmol/L p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂SB203580、100 nmol/L c-Jun N末端激酶(JNK)信号通路抑制剂SP600125和150 nmol/L胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制剂U0126预处理1 h,再给予10μg/m L rhHBcAg刺激48 h。之后收集细胞和细胞培养上清,实时定量PCR检测IL-15 mRNA水平,ELISA检测IL-15蛋白水平,Western blot法检测PI3K/Akt和MAPK信号通路分子磷酸化水平。结果与rhHBcAg未刺激组比较,rhHBcAg刺激组IL-15 mRNA和蛋白水平显著升高;与rhHBcAg刺激组比较,p38抑制剂预处理组IL-15水平明显降低,但PI3K/Akt、JNK和ERK抑制剂预处理组IL-15水平未见显著性改变。结论 rhHBcAg通过p38MAPK信号通路上调外周血mDC IL-15的分泌。
[Abstract]:Objective to investigate the mechanism of recombinant human hepatitis B virus core antigen rhHBcAg-induced interleukin-15 (IL-15) secretion by myelogenous dendritic cells (mDCs). Methods Human monocyte magnetic beads negative sorting kit was used to separate peripheral blood monocytes. Granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) IL-4 and tumor necrosis factor 伪 (TNF- 伪) were used to induce differentiation into mDC10 渭 g / mL rhHBcAg for 6 d, and 25 渭 mol/L phosphatidylinositol 3-kinase / protein kinase Pi _ 3K / Akt signal pathway inhibitor LY294002K / Akt1 渭 mol/L p38 mitogen-activated, respectively. Protein kinase p38 MAPK signal pathway inhibitor SB203580 / 100 nmol/L c-Jun N-terminal kinase (SP600125) and 150 nmol/L extracellular signal-regulated kinase (U0126) signal pathway inhibitor U0126 were pretreated for 1 h and then stimulated with 10 渭 g / mL rhHBcAg for 48 h. Then the cells were collected. And cell culture supernatant, Real time quantitative PCR was used to detect the level of IL-15 mRNA and Elisa was used to detect the level of IL-15 protein. Western blot assay was used to detect the phosphorylation of PI3K/Akt and MAPK signaling pathway. Results the IL-15 mRNA and protein levels in rhHBcAg stimulated group were significantly higher than those in unstimulated rhHBcAg group. Compared with the rhHBcAg stimulation group, the level of IL-15 in the P38 inhibitor pretreatment group was significantly lower, but the IL-15 level in the PI3K / Aktnk preconditioning group and the ERK inhibitor pretreatment group was not significantly changed. Conclusion rhHBcAg up-regulates the secretion of mDC IL-15 in peripheral blood through p38 MAPK signaling pathway.
【作者单位】： 上海中医药大学附属曙光医院肝病科细胞免疫实验室;
【基金】：国家自然科学基金(81473477,81403354,81473629,81403351,81503545) 国家“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项(2012ZX10005004-002) 上海市科委科技支撑项目(16401970600);上海市科委扬帆计划(14YF1411600,15YF1412300);上海市科委生物引导项目(16401931300) 上海市中医药事业发展三年行动计划项目(ZY3-LCPT-1-1001,ZY3-CCCX-3-3027,ZY3-CCCX-3-3029,CY3-CCCX-3-2006) 上海中医药大学预算内项目(2014YSN39) 上海申康市级医院新兴前沿技术联合攻关项目(SHDC12016121)
【分类号】：R392

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 Yasuteru Kondo;Koju Kobayashi;Yoshiyuki Ueno;Masaaki Shiina;Hirofumi Niitsuma;Noriatsu Kanno;Tomoo Kobayashi;Tooru Shimosegawa;;Mechanism of T cell hyporesponsiveness to HBcAg is associated with regulatory T cells in chronic hepatitis B[J];World Journal of Gastroenterology;2006年27期

2 ;Influence of HBcAg in liver cell plasma on expression of transforming growth factor-beta 1 in liver tissue of low-grade chronic hepatitis B patients[J];World Journal of Gastroenterology;2006年01期

3 高敏;卢诚震;王怡;翟璐;郭洁;周莉;韩旭;刘勇钢;曹莉;;慢性乙型肝炎病毒感染者肝组织HBcAg表达与临床及病理特征的关系[J];临床肝胆病杂志;2012年03期

4 朱明宝,张习坦,马静,马贤凯;应用大肠杆菌合成的HBcAg检测抗-HBc的结果[J];解放军医学杂志;1983年06期

5 侯馨岳,郭贤华,陶义训,马贤凯,丁广治,于公义;第二代基因工程乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的质量鉴定和应用[J];上海免疫学杂志;1986年03期

6 程琪琳,陆志檬,王耆煌;酶联免疫吸附试验检测HBcAg[J];上海免疫学杂志;1986年05期

7 江淑芳,武建国;血清HBcAg的检测及其意义[J];江苏医药;1987年04期

8 黄耀煊;大肠杆菌合成HBcAg的生产、提纯及其特性[J];临床肝胆病杂志;1988年03期

9 张守仁,曹立森,沙安莉;血清HBcAg放射免疫竞争法检测[J];临床肝胆病杂志;1988年03期

10 姜众,谭承项,郑铣;DOUBLE IMMUNOCYTOCHEMICAL STAINING FOR HBsAg AND HBcAg IN HEPATOCELLULAR CARCINOMA AND SURROUNDING NONTUMOROUS LIVER TISSUE[J];Chinese Journal of Cancer Research;1989年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 钱刚;尹燕跃;肖影群;余海滨;;肝组织HBcAg表达的临床意义[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年

2 钱刚;尹燕跃;肖影群;余海滨;;肝组织HBcAg表达的临床意义[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年

3 高敏;卢诚震;王怡;翟璐;郭洁;周莉;韩旭;刘勇钢;;慢性HBV感染者肝组织HBcAg表达与临床病理特征的关系[A];第四届中国医师协会感染科医师大会暨传染病诊治高峰论坛、浙江省医学会肝病、感染病学学术年会论文汇编[C];2011年

4 高敏;卢诚震;王怡;翟璐;郭洁;周莉;韩旭;刘勇钢;;慢性HBV感染者肝组织HBcAg表达与临床病理特征的关系[A];中华医学会第十六次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2013年

5 高敏;卢诚震;王怡;翟璐;郭洁;周莉;韩旭;刘勇钢;;慢性HBV感染者肝组织HBcAg表达与临床病理特征的关系[A];第三届全国病毒性肝炎慢性化重症化基础与临床研究进展学术会议论文汇编[C];2013年

6 何清;唐奇远;吕德良;敖飞健;唐尉;唐怡敏;黄珊;张香梅;乐晓华;;958例慢性乙肝患者肝细胞内HBcAg分布规律的研究[A];第二届全国病毒性肝炎慢性化重症化基础与临床研究进展学术会议论文汇编[C];2012年

7 周凤霞;王小川;王铁忠;;乙型肝炎500例血清HBcAg测定的临床分析[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年

8 施理;易学瑞;孔详平;刘树人;祖萍;刘惠萍;张宜俊;;HBcAg刺激对慢性HBV感染者外周血单个核细胞分泌IFN-r的影响[A];中华医学会第十二次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2005年

9 张玉果;王宝恩;欧晓娟;王晓明;王泰龄;;长期阿德福韦治疗前后肝内病变及HBsAg、HBcAg检测的临床意义[A];第一届全国疑难重型肝病大会、第四届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2008年

10 唐奇远;何清;乐晓华;吕德良;张香梅;敖飞健;唐怡敏;黄珊;;慢乙肝患者肝细胞HBcAg与肝组织炎症之间的相关性[A];全国第3届中西医结合传染病学术会议暨中国中西医结合学会传染病专业委员会第2届委员会议论文汇编[C];2010年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 李明;“两对半”各项指标的含义[N];医药养生保健报;2008年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 马雁冰;主动免疫干预TGF-β信号通路对慢性哮喘模型气道炎症反应及重塑的影响[D];北京协和医学院;2016年

2 聂凡;慢性HBV携带者肝细胞内HBcAg分布状态及补肾法的干预效应[D];广州中医药大学;2014年

3 周健;CpG-HBcAg重组质粒对BALB/c小鼠及人树突状细胞免疫作用的研究[D];华中科技大学;2009年

4 贾红宇;HBcAg基因修饰的DC疫苗抗HBV的实验研究[D];浙江大学;2005年

5 陈安;一个新的HBcAg之H-2K～d限制性表位的鉴定及其功能特性研究[D];第三军医大学;2004年

6 石庆凤;自体树突状细胞疫苗治疗乙型肝炎病毒感染者的免疫机制研究[D];重庆医科大学;2008年

7 盖丽丽;小柴胡片对慢性乙肝患者外周血树突状细胞抗原递呈的影响[D];广州中医药大学;2007年

8 周云;IFN-γ延长HBV持续时间及机制研究[D];华中科技大学;2013年

9 孙莉静;乙型肝炎病毒相关性肾炎治疗的基础与临床研究[D];第二军医大学;2007年

10 李宁;MxA蛋白通过与乙型肝炎病毒的核心抗原相互作用抑制病毒复制[D];浙江大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王磊;IFN-β及IRF-7在急性HBV感染小鼠模型中的表达分析[D];重庆医科大学;2015年

2 郑启忠;慢性乙型肝炎中医证型与肝组织淋巴细胞亚群分布及HBcAg表达的关系[D];福建中医药大学;2015年

3 孔练花;脂质体介导HBcAg基因转染人树突状细胞的转染效率及其功能研究[D];南京医科大学;2007年

4 陈建华;慢病毒介导强制泛素化HBcAg基因修饰小鼠髓源性树突状细胞体外诱导细胞毒性T淋巴细胞反应[D];苏州大学;2011年

5 李红;慢性乙型肝炎患者血清HBcAg的状态研究[D];重庆医科大学;2009年

6 梁惠卿;HBeAg阳性慢性乙型肝炎肝组织HBcAg表达模式与干扰素-α疗效关系的临床研究[D];厦门大学;2009年

7 张千里;HBcAg展示技术表达含有礁珊瑚荧光蛋白的病毒样颗粒[D];上海交通大学;2011年

8 杜莹;乙型肝炎病毒核心抗原在HepG2细胞膜表达的实验研究[D];重庆医科大学;2008年

9 孙士明;以HBcAg为基础的肝细胞癌治疗性疫苗的构建、表达和纯化[D];吉林大学;2009年

10 梁敏锋;HBcAg18-27V/I变异体对慢性乙型肝炎患者外周血HLA-A2限制性T淋巴细胞功能的影响[D];第一军医大学;2007年

，

本文编号：1509463