螺内酯对醛固酮诱导的体外培养人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化低密度酯蛋白受体-1（LOX-1）mRNA表达的影响

发布时间：2018-02-14 05:00

  本文关键词： 螺内酯 血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 醛固酮 脐静脉内皮细胞　出处：《安徽医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：通过体外培养脐静脉内皮细胞，给予药物（螺内酯）及LOX-1化学拮抗剂（聚肌苷酸）作用，并加以醛固酮诱导，观察药物组、化学拮抗剂组及阴性对照组、阳性对照组之间血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）的mRNA表达的差异，从而证明醛固酮拮抗剂螺内酯对脐静脉内皮LOX-1基因表达的影响，并进一步探讨这种作用对于某些心血管疾病可能的预防及延缓作用。 方法：实验于2011年5月至2011年10月在安徽医科大学第一附属医院中心实验室完成。①购买脐静脉内皮细胞株，HUVECs(ECV304)购自南京凯基生物公司，在中心实验室常规传代培养。用凯基-1640培养基+20%胎牛血清（南美HYCLON公司），37℃、5%CO2条件培养。待细胞生长成单层达90%培养面积后，，用0.25%胰酶消化液消化、传代、冻存。2～5代HUVECs用于实验。②将培养细胞分别按细胞处理方式不同分为6组阴性对照组：普通1640培养基(A组)；不同浓度ALD组：分别加入不同浓度ALD（10、100、1000nmol/L,分别为B、C、D组）；ALD+PolyI组（E组）：先用PolyI（250mg/L）预先处理2h后再以1000nmol/LALD共同培养24h；ALD+Spiro组（F组）用1000nmol/LALD+1μmol/LSpiro二者共培养24h，③用2～5代HUVECs以2×104接种于24孔板，培养约48h左右待细胞汇集成单层达80%培养面积，换无血清1640培养基饥饿培养12h后按不同分组及方法加药，各组细胞与药物共培养24h后收获细胞④药物作用24h后收集细胞，用Trizol试剂提取细胞总RNA，采用RT-PCR检测每组细胞LOX-1mRNA的含量。RT-PCR结果通过凝胶成像处理系统做积分吸光度测定和分析，以各组目的基因扩增条带的吸光度值与内参β-actin条带的吸光度值之比作为目标mRNA的表达量。 结果：①实验重复三次，体外培养的脐静脉内皮细胞存活良好，以0.4%的台盼兰染液染色后计数，细胞存活率约为96%-98%。②与阴性对照组比较一定浓度醛固酮可以明显上调脐静脉内皮细胞表面LOX-1mRNA的表达P0.05差异有统计学意义。③醛固酮在一定的浓度范围内呈剂量依耐性上调体外培养的脐静脉内皮细胞LOX-1mRNA表达，即LOX-1mRNA表达量BCD，三者相互比较P均0.05。④与不同浓度醛固酮组比较一定浓度的螺内酯可以有效阻止醛固酮诱导的LOX-1mRNA表达上调，P0.05差异有统计学意义，⑤螺内酯组及聚肌苷酸组与阴性对照组比较，P0.05无统计学意义。⑥螺内酯组与多聚肌苷酸组相比P0.05差异无统计学意义。（D组与A组相比较P值为0.001,D组与E、F组比较P值分别为0.001及0.002，A组与E、F组相比P值分别为0.584及0.951，E、F之间比较P值为0.544，） 结论：螺内酯可以下调醛固酮诱导的体外培养脐静脉细胞LOX-1mRNA的表达，可能具有抗氧化应激、抗动脉粥样硬化的作用。
[Abstract]:Objective: to culture umbilical vein endothelial cells (HUVEC) in vitro, and to observe the effects of spironolactone and LOX-1 chemical antagonist (polyinosine), and aldosterone induction, to observe the drug group, the chemical antagonist group and the negative control group. The difference of mRNA expression of hemagglutinin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1 LOX-1 between the positive control group, thus proving the effect of aldosterone antagonist spironolactone on the expression of LOX-1 gene in umbilical vein endothelium. The possible preventive and delayed effects of this action on some cardiovascular diseases were also discussed. Methods: the experiment was completed from May 2011 to October 2011 in the Central Laboratory of the first affiliated Hospital of Anhui Medical University. Normal passage culture was carried out in the central laboratory. 20% fetal bovine serum was cultured in Kaiji 1640 medium (37 鈩

本文编号：1509930