缺氧预处理星形胶质细胞分泌GDNF减少神经元凋亡

发布时间：2018-02-16 09:17

  本文关键词： 缺氧预处理 星形胶质细胞 胶质细胞源性神经营养因子 凋亡　出处：《辽宁医学院》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的 观察缺氧预处理后星形胶质细胞GDNF表达变化对神经元凋亡的影响。 方法 神经元及星形胶质细胞的培养均应用酶消化法及机械分离法。分别应用NSE和GFAP免疫细胞化学染色对神经元及星形胶质细胞进行鉴定。将培养成熟的神经细胞放到厌氧培养箱中，分别缺氧30、60、90、120、180min再复氧24h，用ELISA法检测细胞上清液中LDH漏出率，，找出神经元与星形胶质细胞共同的预处理及再缺氧时间。星形胶质神经细胞被分为正常对照组、预处理+缺氧组、缺氧组，每组根据最后一次缺氧再灌注不同时间又分为6h、12h、24h、36h4组用ELISA方法检测培养基中GDNF含量。将正常对照组的星形胶质细胞培养基制备成ACM1，预处理+缺氧组的星形胶质细胞培养基制备成ACM2，利用GDNF抗体中和ACM2中GDNF，制备成ACM3；将神经元分为正常对照组、预处理+缺氧组、缺氧组，用不同条件培养基孵育神经元，采用流式细胞术检测神经元凋亡率。 结果 神经元及星形胶质细胞分别培养至第6d和第9d成熟，NSE、GFAP染色阳性细胞分别为85.23%±1.72%、99.11%±2.57%。神经元缺氧30分钟LDH漏出率很低，60min以后LDH漏出率增加呈递增趋势；星形胶质细胞缺氧30min与60min相比较，LDH漏出率在统计学上无显著差异（P0.05），其余三组比较均有显著性差异（P0.05）。缺氧组GDNF含量在再灌注6h表达增加，24h达到高峰（P0.05）；预处理+缺氧组GDNF含量逐渐增高，不同再灌注时间点均明显高于其它两组（P0.05）。流式细胞术检测神经元凋亡率，可见预处理+缺氧组神经元凋亡率低于缺氧组，加入ACM2后凋亡率较另外两组有显著性差异（P0.05）。 结论 缺氧预处理可诱导星形胶质细胞GDNF高表达，并明显降低神经元的凋亡。
[Abstract]:Purpose To observe the effect of GDNF expression on neuron apoptosis after hypoxia preconditioning . method The neurons and astrocytes were identified by chemical staining of NSE and GFAP . The neurons were divided into normal control group , pretreatment + hypoxia group and hypoxia group . The neurons were divided into normal control group , pretreatment + hypoxia group and hypoxia group . Results Compared with the other two groups ( P0.05 ) , the content of GDNF in hypoxic group was significantly higher than that in the other two groups ( P0.05 ) , and the apoptosis rate of the pretreated + hypoxia group was lower than that in the other two groups ( P0.05 ) . Conclusion Anoxia pretreatment can induce high expression of GDNF in astrocytes and decrease the apoptosis of neurons .

【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R363

【共引文献】

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本文编号：1515175