白色念珠菌CaTIP41基因高表达菌株的构建及鉴定

发布时间：2018-02-24 10:53

  本文关键词： 白色念珠菌 CaTIP基因 高表达　出处：《中国病原生物学杂志》2017年09期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的构建白色念珠菌CaTIP41基因高表达菌株,并观察其高表达对细胞耐受遗传毒性试剂MMS的影响。方法将白色念珠菌CaTIP41基因的ORF置于高表达质粒载体pCaEXP的MET3启动子后,构建pCaEXP-CaTIP41高表达质粒,线性化后整合到基因组的RP10位点,利用半定量PCR和RT-PCR方法检测CaTIP41基因转录水平,利用平板表型试验结合菌株存活率试验检测CaTIP41基因高表达对细胞耐受遗传毒性试剂的影响。结果成功构建了高表达载体pCaEXP-CaTIP41;线性化后的载体成功整合到基因组上RP10位点,其中4号转化子中CaTIP41基因转录水平较高,为野生型菌株的4.23倍;在MMS胁迫条件下,CaTIP41基因高表达菌株存活率明显下降。结论利用pCaEXP载体成功构建了CaTIP41基因高表达菌株,且CaTIP41基因高表达会抑制细胞对遗传毒性试剂MMS的耐受。
[Abstract]:Objective to construct a high expression strain of Candida albicans CaTIP41 gene and to observe the effect of its overexpression on the cytotoxic reagent MMS. Methods the ORF of CaTIP41 gene of Candida albicans was placed in the MET3 promoter of the high expression plasmid pCaEXP. The high expression plasmid of pCaEXP-CaTIP41 was constructed and linearized and integrated into the RP10 site of the genome. The transcription level of CaTIP41 gene was detected by semi-quantitative PCR and RT-PCR methods. The effect of high expression of CaTIP41 gene on cell tolerance to genotoxicity reagent was detected by plate phenotypic test and strain survival test. Results the high expression vector pCaEXP-CaTIP41 was successfully constructed, and the linearized vector was successfully integrated into the RP10 site of the genome. The transcription level of CaTIP41 gene in transformant No. 4 was 4.23 times as high as that of wild-type strain, and the survival rate of high expression strain of CaTIP41 gene was significantly decreased under MMS stress. Conclusion High expression strain of CaTIP41 gene was successfully constructed by using pCaEXP vector. The overexpression of CaTIP41 gene can inhibit the tolerance of cells to the genotoxic reagent MMS.
【作者单位】： 南通大学医学院病原生物学系;
【基金】：江苏省高校自然科学研究面上项目(No.16KJB310012) 南通市科技计划项目(No.MS12015107) 南通大学大学生创新训练计划项目(No.2016095&2017145)
【分类号】：R379.4

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本文编号：1529974