培养胚胎、小儿皮肤成纤维细胞的比较及TGF-β1对小儿成纤维细胞的干预研究

发布时间：2018-02-28 06:33

  本文关键词： 皮肤 成纤维细胞 胶原 无瘢痕愈合　出处：《泸州医学院》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：研究培养人胚胎、小儿皮肤成纤维细胞及TGF-β1干预后小儿皮肤成纤维细胞的盘状结构域受体1(discoidin domain receptor; DDR-1)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinases; MMP-13)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen; PCNA)、I型胶原(collagen I; Col-I)及III型胶原(collagen III; Col-III)的表达及相互关系,从而探讨I、III型胶原的可能降解途径并观察培养胚胎与小儿皮肤成纤维细胞的形态特征。方法：①原代培养小儿包皮成纤维细胞(human postnatal dermal fibroblast; hPDF)和人胚胎皮肤成纤维细胞(human fetal dermal fibroblast; hFDF)并传代；②应用HE染色法观察hFDF与hPDF的形态结构特点；③应用免疫组织化学S-P法检测hFDF与hPDF的DDR-1、 MMP-13、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen; PCNA)、I型胶原(collagen I; Col-I)及Ⅲ型胶原(collagen III; Col-III)的表达；④利用外源性转化生长因子β1(TGF-β1)(5ng/ml)干预hPDF,并设立TGF-β1未干预的对照组,分别于TGF-β1孵育8小时、24小时、48小时、96小时收获细胞；⑤应用免疫组织化学S-P法观察不同时间点TGF-β1干预组与对照组hPDF的PCNA和DDR-1、 MMP-13、I型胶原及Ⅲ型胶原的表达；⑥应用IX-71(OLYMPUS)显微成像系统在低倍(×100)视野下观察分析及照相,用Image-pro6.0图像分析系统测定各项指标的平均光密度值；⑦所得数据以均数±标准差(x±s)表示。采用spss19.0统计软件进行统计学分析,应用两独立样本t检验、秩和检验、重复测量方差分析、单因素方差分析、LSD检验及多重线性回归分析法,P＜0.05为具有统计学意义。结果：①hFDF与hPDF形态都可表现为长梭形,核大,核仁明显。(2) hFDF组DDR-1、MMP-13、I型胶原、III型胶原及PCNA的平均光密度值皆高于hPDF组(P0.05),hFDF组与hPDF组的III型胶原/I胶原无统计学意义(P0.05)。③hPDF组中DDR-1对I型胶原、III型胶原、 MMP-13,I型胶原对DDR-1、III型胶原、MMP-13,[II型胶原对Ⅰ型胶原、DDR-1、 MMP-13的线性回归方程具有显著性,而hFDF组中的各线性回归方程不具备显著性。④TGF-β1干预与对照组的两组细胞在不同时间点上Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、DDR-1、 MMP-13、 PCNA的平均光密度值不同(P0.05),其中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-13表达的基线上调(P0.05)。⑤TGF-β1干预后拟合出DDR-1对Ⅰ型胶原、MMP-13, I型胶原对DDR-1、 MMP-13及Ⅲ型胶原对Ⅰ型胶原、DDR-1、 MMP-13的线性回归方程皆具有统计学意义。结论：①hFDF比hPDF功能活跃。②在hPDF中DDR-1与Ⅲ型胶原之间存在相互作用的正反馈环路。③MMP-13可以促进成纤维细胞合成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原。④胶原—成纤维细胞信号系统中,hPDF βY解胶原的机制可能与胶原产生→激活胶原受体DDR-l→激活基质金属蛋白酶MMP-13途径有密切关系,但hFDF的胶原降解机制可能与此途径无关。⑤在hPDF中,TGF-β1可以促进I型和Ⅲ型胶原、MMP-13的合成。⑥TGF-β1干预后,hPDF的增殖能力降低。⑦TGF-β1干预后在hPDF中,I型胶原与DDR-1之间的相互作用存在正反馈环路。⑧TGF-β1干预后,胶原产生→激活胶原受体DDR-1→激活基质金属蛋白酶MMP-13途径在小儿胶原降解中发挥了作用,但TGF-β干预后小儿胶原的降解可能并非由其一条途径完成,还存在其它途径及细胞因子的协同作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329.2

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本文编号：1546166