IL-13对IL-13Ra2表达的调控及其与胶原蛋白生成的相关性

发布时间：2018-03-09 18:55

  本文选题：IL-13　切入点：IL-13Rα2　出处：《南昌大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的： 据世界卫生组织的最新报道,纤维化疾病已经成为分布全球的重大公共卫生问题。近十年来,纤维化疾病的发病率和致死率呈现出显著上升的趋势,相关临床病例持续增长。围绕纤维化疾病的发病原因与机制的研究正日益成为科研人员关注的焦点,基于特异性表达受体或分子表面标记的抗纤维化药物研发受到科学界和医药企业的高度重视。 研究表明,损伤修复、非可控性炎症、肿瘤和动脉粥样硬化等多种疾病都可出现纤维化的表现。而IL-13是纤维化过程中促进细胞外基质的主要来源——胶原蛋白生成的主要细胞因子之一。IL-13有两种不同的受体：IL-13Rα1和IL-13Rα2。IL-13Rα1单独存在时与IL-13的结合力很低,只在与协同性因子IL-4Rα结合形成受体复合物时才能有效传递IL-13的信号并发挥其生物学功能。IL-13Rα2与IL-13的亲和力是IL-13Rα1的约5,000倍,由于其胞内区很短目前认为它可能不具有信号转导的功能。IL-13Ra2有三种表型：包括胞内型、膜表面型和可溶型,三者的转换机制目前仍不清楚,其对IL-13依赖的胶原蛋白生成以及纤维化疾病的作用还存有争议。 本文旨在通过对IL-13刺激人肺成纤维细胞和肝星状细胞后增殖、迁移和胶原蛋白生成情况的检测与分析,探讨IL-13对IL-13Rα2表达的调控及其与胶原蛋白生成的相关性,为临床纤维化疾病的诊治提供新的实验依据和理论参考。 方法： 1.以IL-13不同浓度刺激人肝星状细胞LX-2和人肺成纤维细胞HFL1,构建纤维化体外实验模型； 2.MTT法和Transwell技术观察IL-13对细胞增殖和迁移能力的影响； 3. RT-PCR和ELISA检测IL-4Rα、IL-13Rαl和胞内型、可溶型IL-13Rα2表达； 4.免疫细胞化学(荧光法)胞内型、膜表面型IL-13Rα2表达与定位； 5. RT-PCR检测Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达； 6.羟脯氨酸法(消化法)细胞培养上清液总胶原含量分析。 结果： 肝星状细胞 1. IL-13能促进肝星状细胞LX-2的增殖、迁移、Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达以及总胶原蛋白含量增加,且表现出较为明显的剂量依赖方式； 2.正常情况下肝星状细胞即能表达IL-4Rα和IL-13Rα1,而IL-13对两者的表达水平没有影响； 3.正常肝星状细胞LX-2不表达IL-13Rα2,IL-13刺激后不能介导或上调其表达。 肺成纤维细胞 1.与对照组相比,低浓度范围内(5～20 ng/m1)的IL-13对肺成纤维细胞HFL1增殖、迁移、Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达和总胶原蛋白含量没有显著影响； 2.高浓度IL-13(50,100 ng/ml)能以剂量依赖的方式显著促进肺成纤维细胞HFL1的增殖、迁移、Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达和总胶原蛋白含量的增加； 3. IL-13不改变肺成纤维细胞LX-2的IL-13Rα1和IL-4Rα表达水平； 4.未加IL-13刺激的正常肺成纤维细胞不表达IL-13Rα2；IL-13在低浓度范围(5～20 ng/ml)内能上调IL-13Rα2的表达；高剂量的IL-13对IL-13Rα2表达的上调作用减弱(IL-13：50 ng/ml)甚至消失(IL-13：100 ng/ml)；细胞内的IL-13Rα2主要分布于近细胞核的中央区,膜表面IL-13Rα2的表达很少,可溶型IL-13Rα2的含量约为胞内型IL-13Rα2的1/2～2/3。 结论： IL-13能促进人肝星状细胞和肺成纤维细胞的增殖、迁移和胶原蛋白生成(不改变IL-13Rα1和IL-4Rα的表达水平),但其作用受IL-13Rα2表达的影响。当IL-13Rα2表达缺失时,IL-13促纤维化的效应显著且呈剂量依赖性；而当IL-13Rα2表达上调时,IL-13的作用被抑制和减弱。
[Abstract]:Objective:
According to the latest report of the WHO, fibrosis has become a major public health problem in the world. In the past ten years, fibrosis disease incidence and mortality rate showed a significant upward trend, the relevant clinical cases of sustained growth. Research on Causes and mechanism of fibrosis disease is increasingly becoming the focus of attention of researchers. Specific expression of receptors or molecular marker of anti fibrosis drug development by the scientific community and the medical enterprise attaches great importance on.
Research shows that the damage repair, nonresolving inflammation, cancer and atherosclerosis and other diseases may cause fibrosis. In the process of promoting fibrosis and IL-13 is the main source of extracellular matrix -- one of the main cytokines collagen production.IL-13 has two different receptors: IL-13R and IL-13R alpha 2.IL-13R alpha 1 alpha 1 alone binding with IL-13 is very low, only receptor complexes formed in combination with synergy factor IL-4R alpha signal can effectively transfer IL-13 and exert its biological function of.IL-13R and IL-13 2 alpha IL-13R alpha 1 affinity is about 5000 times, due to its short cytoplasmic region at present that it may not function in.IL-13Ra2 with signal transduction has three phenotypes: including intracellular, membrane and soluble, the conversion mechanism of the three are still unclear, the IL-13 dependent generation of collagen and fiber The role of the disease is still controversial.
This paper aims to stimulate the IL-13 human lung fibroblast cells and hepatic stellate cell proliferation, detection and analysis of migration and collagen formation, to investigate the correlation between IL-13 IL-13R expression and regulation of alpha 2 collagen production, to provide new experimental and theoretical basis for clinical diagnosis and treatment of fibrotic diseases.
Method锛，

本文编号：1589812