兔红骨髓中成骨性生长因子的测定及其体外诱导成骨的研究

发布时间：2018-03-10 17:34

本文选题：BMSCs　切入点：红骨髓上清液　出处：《蚌埠医学院》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景：骨折延迟愈合及骨不连是骨科常见疾病，自体红骨髓移植用于治疗骨折延迟愈合及骨不连临床效果显著，其作用机制尚需进一步探讨。目的：本研究旨在探讨兔红骨髓上清液中六种成骨性生长因子：骨形态发生蛋白-2(bone morphogonetic protein-2,BMP-2)、胰岛素样生长因子-I (insulin-like growthfactor-I,IGF-I)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastic growth factor,bFGF)、血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)、血管内皮生长因子165(vascularendothelial growth factor165, VEGF165)的含量。并探讨兔红骨髓上清液用于体外分离培养的兔骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）向成骨细胞分化的影响，为红骨髓治疗骨折延迟愈合及骨不连提供理论与实验依据。方法：1.通过酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssay，ELISA）测定兔红骨髓及外周血中BMP-2、IGF-I、bFGF、PDGF-BB、TGF-β1、VEGF165的含量。2.密度梯度离心法分离培养兔骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stemcells, BMSCs）。3.流式细胞术(FCM)检测兔BMSCs细胞表面黏附分子CD44、CD45表达。4.含15%红骨髓上清液的DMEM/F12诱导BMSCs成骨分化。5.倒置显微镜逐日观察细胞生长及形态特征。6.MTT法检测BMSCs增殖情况。7.茜素红染色检测钙结节形成情况。8.碱性磷酸酶染色检测细胞碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase,ALP)活性。9.酶动力学法检测细胞碱性磷酸酶活性。10.RT-PCR检测骨钙素（Osteocalcin）和I型胶原（type I collagen）mRNA的表达。结果：1.兔红骨髓上清液中成骨性生长因子BMP-2、IGF-I、bFGF、PDGF-BB、TGF-β1、VEGF165含量依次为分别为(1.26±0.14) μg/L，(3.87±0.35) μg/L，(4.34±0.22) ng/L，(4.08±0.36) ng/L，(31.45±1.91) ng/L，(14.81±2.01) ng/L显著高于兔外周血中对应含量(0.10±0.02) μg/L,(0.19±0.04) μg/L,(0.28±0.04) ng/L,(0.29±0.08) ng/L,(1.86±0.38) ng/L,(0.99±0.23) ng/L，差异均有显著性(P 0.01)。2.成功地分离培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)，，CD44阳性表达率99.67%，CD45阳性表达率2.34%。3.红骨髓上清液对BMSCs的增殖作用显著高于对照组（胎牛血清组），从第3天起至第9天OD值差异有统计学意义（P0.05）。4.红骨髓上清液能显著增加成骨分化的BMSCs的ALP含量，实验组[第3,6,9,12和15天:(4.55±0.15),(8.98±0.20),(12.83±0.21),(15.65±0.23),(15.23±0.19) U/100ml]，与对照组胎牛血清组比较[第3,6,9,12和15天:(2.78±0.08),(3.31±0.13),(3.77±0.13),(4.43±0.16),(4.23±0.12) U/100ml]，差异有显著性(P0.01)。5.含15%红骨髓上清液的DMEM/F12诱导BMSCs成骨分化，14天后BMSCs茜素红染色阳性、ALP染色阳性，21天后BMSCs阳性表达Col I和OCN mRNA，对照组均为阴性表达。结论： 1.兔红骨髓上清液中成骨性生长因子BMP-2、IGF-I、bFGF、PDGF-BB、TGF-β1、VEGF165含量显著高于兔外周血，差异有显著性(P0.01)。 2.成功地分离培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)。 3.红骨髓上清液能显著促进BMSCs细胞增殖。 4.红骨髓上清液能显著增加成骨分化BMSCs的ALP含量。 5.红骨髓上清液能诱导BMSCs成骨分化。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329.24

【引证文献】