MiRNAs在胚胎植入和人类疾病中的研究

发布时间：2018-03-13 12:18

本文选题：miR-143　切入点：miR-320　出处：《北京协和医学院》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：近年来,miRNA的研究已成为生命科学理论和应用研究的热点。在理论方面,着重研究miRNA如何通过调节转录后基因表达模式参与细胞分化、增殖和凋亡等过程,进而在胚胎植入和植入后发育等方面发挥作用;在应用方面,miRNA组织特异性表达模式及SNP改变有可能成为疾病预警和诊断的新标志。本研究从miRNA角度研究胚胎植入和爱尔茨海默疾病中miRNA所起的作用。一、MiR-143和miR-320在胚胎植入过程中的作用目的:分析2个大鼠子宫胚胎植入前期和植入期差异表达miRNAs,即miR-143和miR-320在大鼠胚胎植入过程中的作用及其在人子宫内膜基质细胞中的作用,为研究miRNAs在胚胎植入过程中的作用机制提供理论基础。方法:1.利用Northern印迹和原位杂交,分析miR-143和miR-320在大鼠胚胎植入过程中的表达变化及时间和空间分布2.利用Northern印迹和原位杂交,检测miR-143和miR-320假孕、人工诱导蜕膜化和延迟着床激活大鼠子宫中的表达模式,分析了 17β-雌二醇和孕酮对于大鼠子宫中miR-143和miR-320表达的影响。3.利用Edu、MTT、Tunel、Transwell小室等方法检测miRNAs对人子宫内膜基质细胞的增殖、凋亡、迁移、浸润功能的影响。4.利用Western blot、双荧光素酶活性分析等分子生物学方法验证miRNAs与LIFR的相互作用。结果:1.MiR-143在大鼠胚胎植入期和植入后期表达水平显著高于植入前期,其定位于子宫内膜腺上皮细胞、内腔上皮细胞、子宫内膜基质和蜕膜。MiR-320在大鼠胚胎植入期表达水平明显低于植入前期和植入后期,并定位于子宫内膜植入位点子宫内膜腺上皮;2.大鼠假孕对miR-143和miR-320的表达水平没有明显影响。延迟着床激活能促进miR-143的表达,但抑制miR-320的水平。人工诱导蜕膜化能促进miR-143的表达,对miR-320的表达没有显著影响。17β-雌二醇和孕酮对大鼠子宫miR-143的表达水平没有明显的影响,但孕酮可诱导大鼠子宫miR-320的表达。3.过表达miR-143,使人子宫内膜基质细胞的浸润能力增强(P0.05),迁移能力没有显著性差别,增殖能力降低(P0.05),凋亡能力没有显著性差别。过表达miR-320,使人子宫内膜基质细胞的浸润能力增强(P0.05),迁移能力没有显著性差别,增殖能力变强(P0.05),凋亡能力没有显著性差别。4.双荧光素酶活性分析显示,miR-143和miR-320与包含"seed"片段PGL3-LIFR 3'-UTR的质粒共转染细胞后降低酶活性,提示miR-143和miR-320的"seed"片段与LIFR的3'-UTR区有一定的结合能力。但仅miR-143过表达或敲低后能影响双荧光素酶的活性,且仅过表达miR-143能抑制LIFR蛋白水平,miR-320对LIFR蛋白的表达没有显著影响。这些结果提示LIFR为miR-143的靶基因,不是miR-320的靶基因。结论:1.在大鼠妊娠早期,miR-143的表达增加有利于胚胎植入的发生,其表达增加主要是由活化的胚泡和蜕膜化引起的。在人子宫内膜基质细胞中,miR-143调节细胞的浸润和增殖的能力,这一作用可能部分是通过调节其靶基因LIFR实现的。2.在大鼠妊娠早期,miR-320的表达降低可能有利于胚胎植入的发生,其表达降低主要是由活化的胚泡引起的,孕酮促进大鼠子宫miR-320的表达。。在人子宫内膜基质细胞中,miR-320参与细胞的浸润和增殖,这一作用可能是通过LIFR以外的通路实现的。二、蒙古人群中miR-124SNP与阿尔茨海默的相关性研究目的:从miR-124方面研究与阿尔茨海默病的关系,为理解AD的发病机制提供新的视角,为研究miRNAs在神经系统退行性疾病中(?)作用机制提供理论基础。方法:1.应用PCR,测序技术和基因型分析,检测病例和对照中的突变和SNP位点。2.应用生物信息学预测SNP位点出现对pri-miR-124二级结构的影响3.应用Northern blot and Real-time PCR检测SNP位点出现对成熟态miR-124的影响。结果:1.在pri-miR-124中发现了 rs531564的G/C的SNP位点,但是这个SNP的出现并没有对阿尔茨海默做出有意义的贡献。2.生物信息学预测,SNP位点G/C导致其二级结构中出现了一个颈环结构的变化。3.Northern blot and Real-time PCR结果显示,成熟态miRNA表达量的上升(P0.05)。结论:尽管miR-124 SNP能够影响成熟态miR-124的产生,但miR-124对蒙古人群阿尔茨海默的影响力不是很大。即使如此,也不能认定miR-124阿尔茨海默无关,仍需要在其他人种中进行深入研究。
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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R3416

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