循环酶法同型半胱氨酸检测关键酶CBS和CBL的开发及试剂盒研制初探

发布时间：2018-03-23 23:01

  本文选题：胱硫醚β-合成酶　切入点：胱硫醚β-裂解酶　出处：《中国生物工程杂志》2017年02期

【摘要】：以酿酒酵母基因组为模板通过PCR分别扩增胱硫醚β合成酶(cystathionine β-synthase,CBS)和胱硫醚β-裂解酶(cystathionine β-lyase,CBL)目的基因片段,经无缝克隆构建表达质粒并转化大肠杆菌菌株E.coli BL21(DE3)。经诱导表达和纯化后,重组蛋白的纯度均达到90%,回收率均达到80%,可溶表达量分别为26 mg/L和332 mg/L。经催化活性测定,CBS的单位酶活为15 U/mg,CBL的单位酶活为72 U/mg。在此基础上初步开发了循环酶法同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)检测试剂盒,实验结果证明该试剂盒的有效性和稳定性均符合体外诊断检测的要求,其检测性能与市售进口同类试剂盒基本一致。
[Abstract]:The Saccharomyces cerevisiae genome as template by PCR were amplified by cystathionine beta synthase (cystathionine beta -synthase, CBS) and cystathionine beta lyase (cystathionine beta -lyase, CBL) gene fragments by seamless cloning plasmid was constructed and transformed into E.coli Strain E.coli (BL21 DE3). After induced expression and purification, the purity of recombinant protein reached 90%, the recovery rate reached 80%, the soluble expression levels were 26 mg/L and 332 mg/L. by catalytic activity, the enzyme activity of CBS units for 15 U/mg units, the enzyme activity of CBL was 72 U/mg. on the basis of the initial development of enzymatic cycling homocysteine (homocysteine, Hcy) test kit, experimental results show that the detection requirements of validity of the kit and stability are in accordance with body outside diagnosis, its detection performance with the commercially imported kit is basically the same.

【作者单位】： 吴江近岸蛋白质科技有限公司研发部;复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室;
【分类号】：R392-33

【参考文献】

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【共引文献】

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