人MTERF3蛋白的原核表达与多克隆抗体制备

发布时间：2018-03-27 21:31

  本文选题：人线粒体转录终止因子　切入点：原核表达　出处：《医学研究生学报》2016年10期

【摘要】：目的人线粒体转录终止因子3(mitochondrial transcription termination factor 3,MTERF3)是线粒体基因表达及能量代谢的负调控因子。文中旨在研究大肠埃希菌中原核表达MTERF3蛋白及制备鼠抗人MTERF3多克隆抗体。方法RT-PCR扩增人MTERF3基因c DNA的完整开放阅读框,克隆至原核表达载体p ET28b,转化大肠埃希菌感受态细胞BL21(DE3),IPTG诱导6×his融合蛋白质表达,Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化重组人MTERF3蛋白,以纯化的重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠制备其特异性多克隆抗体,用ELISA、Western blot和细胞免疫荧光检测抗体的效价和特异性。结果成功在大肠埃希菌细胞中原核表达重组人MTERF3蛋白,并获得高质量的鼠抗人MTERF3多克隆抗体。ELISA结果显示抗体的效价为1∶105,Western blot和免疫荧光结果显示鼠抗人MTERF3能特异性识别天然的MTERF3抗原。结论原核表达的重组人MTERF3蛋白具有良好的免疫原性,其免疫小鼠后获得的多克隆抗体具有高效价和高度的特异性。人MTERF3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备为进一步研究人MTERF3的功能奠定了实验基础。
[Abstract]:Objective 3(mitochondrial transcription termination factor 3 MTERF3) is a negative regulator of mitochondrial gene expression and energy metabolism. The purpose of this paper is to study the prokaryotic expression of MTERF3 protein in Escherichia coli and the preparation of mouse polyclonal antibody against human MTERF3. The complete open reading frame of human MTERF3 gene c DNA was amplified by RT-PCR. The recombinant human MTERF3 protein was cloned into prokaryotic expression vector pET28b and transformed into Escherichia coli (BL21DE-DE3G) IPTG to induce 6 脳 his fusion protein to express Ni2-NTA agarose gel column affinity chromatography to purify recombinant human MTERF3 protein. The purified recombinant protein was used as immunogen to immunize BALB/c mice to prepare its specific polyclonal antibody. The titer and specificity of the antibody were detected by Elisa Western blot and cellular immunofluorescence. Results the recombinant human MTERF3 protein was successfully expressed in Escherichia coli cells. High quality mouse anti-human MTERF3 polyclonal antibody was obtained. Elisa results showed that the titer of the antibody was 1: 105 Western blot and immunofluorescence showed that mouse anti-human MTERF3 could specifically recognize the natural MTERF3 antigen. Conclusion the recombinant human MTERF3 protein expressed in prokaryotic has the ability to recognize natural MTERF3 antigen. Good immunogenicity, The prokaryotic expression of human MTERF3 protein and the preparation of polyclonal antibody laid a foundation for further study on the function of human MTERF3.
【作者单位】： 大理大学基础医学院;云南省昆虫生物医药研发重点实验室;大理市第一人民医院呼吸内科;
【基金】：国家自然科学基金(81560458,31601155) 云南省教育厅科学研究基金(2014Z126) 大理大学博士科研启动基金(BSKY2012018);大理大学大学生创新创业计划项目(2016058)
【分类号】：R392

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本文编号：1673279