Cr（Ⅵ）诱导肝细胞凋亡与线粒体电子传递链功能障碍的关系

发布时间：2018-03-29 14:06

  本文选题：六价铬　切入点：肝细胞　出处：《中南大学》2011年硕士论文

【摘要】：目的：在体外试验系统,初步探讨线粒体电子传递功能障碍在Cr(Ⅵ)诱导细胞凋亡中的作用,进一步阐明Cr(Ⅵ)诱导细胞凋亡的可能机制。 方法：以L-02肝细胞为受试细胞,通过MTT试验检测Cr(Ⅵ)及与呼吸抑制剂(DPI、ROT、AA)或保护剂(Vit C)联合作用对L-02肝细胞存活率的影响,筛选出25μmol/L Cr(Ⅵ)、2.5μmol/L DPI、5μmol/L ROT、lμg/mL AA和2mmol/L Vit C进行后续试验,染毒时间为12h。通过紫外可见分光光度计检测线粒体内Cr(Ⅵ)的还原速率,多功能酶标仪检测细胞内ATP含量和活性氧(ROS)的含量变化,氧电极检测细胞线粒体呼吸功能(耗氧速率),酶标仪检测细胞内caspase-3的活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率检测细胞凋亡 结果： 1.Cr(Ⅵ)引起L-02肝细胞存活率降低：Cr(Ⅵ)在10-100μmol/L处理浓度范围内,能明显引起L-02肝细胞存活率的降低(P0.05),处理浓度和细胞存活率之间存在负相关(r12h=—0.980,P0.05),选取对Cr(Ⅵ)处理的细胞生存率影响较明显2.5μmol/L DPI、5μmol/L ROT1μg/mL AA和2mmol/L Vit C进行后续试验。 2.线粒体内Cr(Ⅵ)还原速率：不同呼吸底物对线粒体中Cr(Ⅵ)的还原速率的影响不同,复合体Ⅰ的底物苹果酸+谷氨酸使线粒体中Cr(Ⅵ)的还原量显著增加,而复合体Ⅳ的底物Vit C使线粒体中Cr(Ⅵ)的还原量明显降低(P0.05)。不同呼吸抑制剂对线粒体中Cr(Ⅵ)的还原速率的影响不同(P0.01)。复合体Ⅳ抑制剂NaN3时,线粒体中Cr(Ⅵ)的还原量最大(P0.05)。 3.Cr(Ⅵ)对肝细胞细胞呼吸功能影响：与对照组相比, Cr(Ⅵ)单独处理组细胞氧耗速率明显降低(P0.05)；与相同浓度的Cr(Ⅵ)单独处理组相比,加入呼吸链抑制剂(DPI、ROT、AA)联合处理组细胞耗氧速率均明显降低(P0.05),加入VitC联合处理组细胞耗氧速率明显增高(P0.05) 4.Cr(Ⅵ)对肝细胞ATP含量的影响：与对照组相比, Cr(Ⅵ)单独处理组ATP含量明显降低(P0.05)；与相同浓度的Cr(Ⅵ)单独处理组相比,加入呼吸链抑制剂(DPI、ROT、AA)联合处理组ATP含量均明显降低(P0.05),加入VitC联合处理组ATP含量明显增高(P0.05) 5.Cr(Ⅵ)对肝细胞氧化应激的影响：与对照组相比,Cr(Ⅵ)单独处理组细胞ROS产量明显增高(P0.05)；与相同浓度的Cr(Ⅵ)单独处理组相比,加入呼吸链抑制剂(DPI、ROT、AA)联合处理组细胞ROS产量均明显增高(P0.05),加入Vit C联合处理组ROS产量明显降低(P0.05)。 6.Cr(Ⅵ)对肝细胞caspase-3的影响：与对照组相比,Cr(Ⅵ)单独处理组caspase-3活性明显升高(P0.05)；与相同浓度的Cr(Ⅵ)单独处理组相比,加入呼吸链抑制剂(DPI、ROT、AA)联合处理组细胞caspase-3活性该变量均明显升高(P0.05),加入Vit C联合处理组细胞caspase-3活性明显降低(P0.05)。 7.Cr(Ⅵ)诱导肝细胞凋亡：与对照组相比,Cr(Ⅵ)单独处理组细胞凋亡率明显升高(P0.05)；与相同浓度的Cr(Ⅵ)单独处理组相比,加入呼吸链抑制剂(DPI、ROT、AA)联合处理组细胞凋亡率均明显升高(P0.05),加入Vit C联合处理组细胞凋亡率明显降低(P0.05)。 结论： 1.Cr(Ⅵ)从线粒体复合体Ⅰ得到电子而被还原,在此还原过程中产生ROS,产生的ROS诱导线粒体损伤和细胞凋亡因子caspase-3释放,从而诱导L-02肝细胞凋亡。 2.主呼吸链抑制剂(尤其是ROT)能使呼吸链电子从复合体Ⅰ漏出,使Cr(Ⅵ)还原增加,使Cr(Ⅵ)诱导细胞凋亡的作用增强。 3. VitC能减轻Cr(Ⅵ)引起的线粒体损伤,使线粒体呼吸功能部分恢复,使细胞内ATP水平升高,影响caspase3的活性,拮抗Cr(Ⅵ)诱导的细胞凋亡。 4.在Cr(Ⅵ)诱导的L-02肝细胞凋亡过程中,电子传递功能障碍起重要作用。
[Abstract]:Objective: To explore the role of mitochondrial electron transport dysfunction in Cr (VI) induced apoptosis, and further elucidate the possible mechanism of Cr (VI) inducing apoptosis.
Methods: the L-02 liver cells were tested by cell MTT assay for detection of Cr (VI) and respiratory inhibitors (DPI, ROT, AA) or (Vit C) combined with protective effects on the survival rates of L-02 liver cells, screened 25 mol/L Cr (VI), 2.5 mol/L DPI, 5 mol/L ROT, l g/mL AA and 2mmol/L Vit C for the subsequent test, exposure time is 12h. by UV VIS spectrophotometer to detect mitochondrial Cr (VI) reduction rate, multifunctional microplate detection of intracellular ATP content and reactive oxygen species (ROS) of the content of oxygen electrode for the detection of cell line mitochondrial respiratory function (oxygen uptake rate), microplate detection of intracellular caspase-3 activity, cell apoptosis was detected by flow cytometry to detect apoptosis
Result锛，

本文编号：1681461