酸性成纤维细胞生长因子对人脐血内皮祖细胞影响的实验研究
发布时间：2018-04-04 10:09
本文选题：酸性成纤维细胞生长因子 切入点：脐血 出处：《福建医科大学》2011年硕士论文
【摘要】：【目的】 观察酸性成纤维细胞生长因子(acid fibroblast growth factor,aFGF)对体外培养人脐血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学功能及凋亡的响,进一步探讨其作用机制。旨在为体外扩增EPCs寻找可能的诱导剂,从而获取数量充足且功能良好的血管组织工程细胞。 【方法】 采用密度梯度离心法从人脐带血获取单个核细胞,贴壁法对细胞进行培养。用包含有VEGF和bFGF的M199培养液对贴壁细胞培养7d后,胰酶将贴壁细胞消化下来后供实验用。并通过如下方法对EPCs进行鉴定:倒置显微镜下对细胞形态进行观察;激光共聚焦显微镜对EPCs结合FITC-UEA-I和吞噬Dil-acLDL的功能进行鉴定;免疫组化检测Ⅷ因子表达;流式细胞仪对细胞表面抗体CD34、VEGFR2、CD133进行测定。 培养7d后,收集贴壁细胞并将其随机分成4组,并分别向不含有其它细胞生长因子的M199培养液中加入aFGF 0μg/L(对照组)、2μg/L、5μg/L、10μg/L分别干预培养6h、12h、24h、48h,再对细胞进行计数。CCK-8试剂盒、改良的Boyden小室法、贴壁法及流式细胞仪分别检测aFGF对EPCs增殖、迁移、黏附功能及凋亡率的影响,24h后用RT-PCR技术检测细胞Bcl-2 mRNA表达。对EPCs的数量及生物学功能用不同剂量aFGF干预后在不同时间点进行时效关系观察,并进一步探讨aFGF抑制EPCs凋亡的机制。 【结果】 密度梯度离心法获取单个核细胞后,贴壁法可成功对细胞进行培养,贴壁细胞通过鉴定证实为EPCs。与对照组比较,aFGF可以显著提高EPCs的生物学功能并抑制其凋亡(P0.05);本研究5μg/L aFGF作用24h对EPCs多数生物学功能及凋亡抑制的影响最为显著,其中黏附功能在aFGF 10μg/L作用12h后改善最为明显(P0.05);在aFGF对EPCs作用24h后,与对照组比较,不同浓度的aFGF均可使人脐血EPCs的Bcl-2 mRNA表达效果显著增强,其中5μg/L aFGF组效果最为显著(P㩳0.05)。 【结论】 1.可利用密度梯度离心法从脐血内分离的单个核细胞中培养出EPCs,贴壁法可对细胞进行培养,贴壁细胞证实为EPCs。 2.aFGF可以提高EPCs的生物学功能并抑制其凋亡。 3.本研究,5μg/L aFGF作用24h对EPCs的多数生物学功能及抑制凋亡的影响最为显著,其中黏附功能在aFGF 10μg/L作用12h后改善最为明显。 4. aFGF对EPCs凋亡的抑制作用可能与上调凋亡抑制基因Bcl-2的表达有关。
[Abstract]:Purpose of the project
To investigate the biological function and apoptosis of endothelial progenitor cells ( EPCs ) in vitro cultured human umbilical cord blood endothelial progenitor cells ( EPCs ) , the mechanism of action of acidic fibroblast growth factor ( aFGF ) was investigated .
Methodology
Human umbilical cord blood was isolated from human umbilical cord blood by density gradient centrifugation . The cells were cultured with adherent cells . After 7 days culture of adherent cells with M199 medium containing VEGF and bFGF , the cells were digested by trypsin . The functions of EPCs were examined under inverted microscope . The expression of FITC - UEA - I and phagocytotic Dil - acLDL were detected by laser confocal microscope . The expression of factor 鈪，
本文编号：1709496
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