Bruton酪氨酸激酶泛素化调节的研究
发布时间：2018-04-06 22:17
本文选题：Bruton酪氨酸激酶 切入点：泛素化 出处：《中国实验血液学杂志》2017年05期
【摘要】：目的:探讨Bruton酪氨酸激酶(Bruton's Tyrosine Kinase,Btk)的代谢调节途径和可能的分子机制。方法:用蛋白酶体抑制剂和/或佛波酯(PMA)处理内源性表达Btk的B细胞系A20、Ramos细胞及转染了外源性Btk的293T、COS-7细胞,应用RT-PCR法检测上述细胞Btk mRNA表达水平,Western blot法检测Btk蛋白表达水平;通过抗Ig M抗体交联BCR刺激A20细胞,检测细胞Btk泛素化水平;用Btk、泛素和Cbl共转染COS-7细胞,检测其泛素化Btk水平;用Btk和编码野生型或突变型泛素(K29R、K48R、K63R)即单泛素的质粒共转染293T细胞,经蛋白酶体抑制剂处理后用抗泛素抗体和抗Btk抗体检测泛素化Btk水平;稳定转染并表达Btk-GFP的293T细胞经氯喹处理后,应用Western blot检测其Btk蛋白表达水平。结果:蛋白酶体特异性抑制剂和/或佛波酯可减少Btk转录,从而引起Btk蛋白表达下降。Btk通过泛素化进行翻译后修饰,泛素化修饰程度与Btk的表达及活化水平有关。Cbl为Btk的E3泛素连接酶,它可导致Btk泛素化。Btk受多聚和/或单泛素化调节,Btk可在溶酶体内发生泛素化和降解,溶酶体抑制剂氯喹可上调Btk的表达。结论:Btk蛋白的表达水平受泛素化途径调节,该调节与Btk的表达水平有关。
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本文编号：1719147
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