骨髓间充质干细胞对仓鼠皮肤深Ⅱ度烫伤的治疗作用及机制研究

发布时间：2018-04-15 06:25

  本文选题：骨髓间充质干细胞 + 烫伤　； 参考：《新疆农业大学》2012年硕士论文

【摘要】：研究目的：建立仓鼠BMSCs稳定的扩增方法。通过动物实验，探索简单方便、易于控制且重复性高的烫伤动物模型建立方法，摸索对仓鼠皮肤的烫伤时间、烫伤程度以及烫伤面积的方法控制，通过对皮肤肥大细胞糜蛋白酶的检测从而探讨骨髓间充质干细胞移植后对皮肤深Ⅱ度烫伤机理研究。方法：采用全骨髓培养法从幼年仓鼠骨髓中分离BMSCs，进行纯化、扩增。通过对培养细胞形态及生物学特性的观察，确立稳定的扩增体系，并鉴定P5代细胞。取健康成年仓鼠9只，用氯胺酮（45mg/kg）腹腔麻醉，待动物麻醉后，背部用硫化钠脱毛剂备皮，分为65℃12秒，75℃12秒，85℃12秒三个创面组，每组3只；用直径为3cm去底的50ml注射器置于动物背部，每只按各个时间组20ml热水进行烫伤，于烫伤后30min观察创面变化，并于烫伤后12小时将每组的创面取材行组织学检查，并对模型进行比较，找出制作深Ⅱ度烫伤模型的条件。将40只仓鼠复制皮肤深Ⅱ度烫伤模型并随机分为：干细胞移植组（A组n=20）和模型对照组（B组n=20），将体外培养至第5代的BMSCs，数目为1×10~7个/ml,通过局部皮下注射加表面涂抹上清的方法移植至干细胞移植组烫伤部位，对照组给予等量的生理盐水，观察创面变化、肉芽组织生长和创面愈合情况;分别于移植后1,3,7,14天每组5只取组织标本按常规方法作苏木精一伊红(HE)染色进行组织学观察。取不同时间点创面组织，通过PCR技术对皮肤肥大细胞糜蛋白酶表达水平检测。结果：采用全骨髓法分离培养骨髓间充质干细胞，获得的细胞数量多，细胞贴壁后增殖较为迅速，BMSCs约3-5日形成成纤维样细胞集落，原代细胞铺满整个培养瓶所需时间为7d左右，原代细胞纯度不高，传代后，可获得纯度较高的BMSCs。对三种模型制作方法的观察，85℃12秒组12小时后全部死亡，65℃12秒与75℃12秒组全部存活，但75℃12秒组精神状态较差，通过组织病理观察，65℃12秒组未能达到深Ⅱ度烫伤要求，而75℃12秒组符合深Ⅱ度烫伤模型要求。对干细胞移植组与对照组创面愈合观察，两组动物皮肤经深Ⅱ度烫伤即刻，皮肤红肿，6h后，表皮灰白。烫伤24h，表皮开始变硬，72h干细胞移植组皮肤开始形成焦痂，A、B两组在结痂时间上差异不显著（P0.05）。在愈合率方面，以90%为愈合参照标准，烫伤后14d，A、B两组间差异具有显著性（P0.05）。烫伤后第7d，镜下观察A组成纤维细胞，毛细血管数量较B组丰富，并有少量的胶原组织形成。14d时，与对照组相比成纤维细胞数量，毛细血管组织明显增多，并形成肉芽组织层，胶原大量沉积。对烫伤后创面1、3、7、14d的组织通过PCR的方法进行糜蛋白酶基因检测，均检测出糜蛋白酶基因，在基因检出方面两组差异不显著（P0.05）。但通过对糜蛋白酶各检测时间点mRNA水平比较，，第3d处于最高表达，与对照组相比，移植组7、14d的mRNA水平存在显著性差异（P0.05）。结论：本研究建立了体外分离纯化、培养扩增仓鼠骨髓MSCs的方法。通过动物实验，得到一种简单方便、易于控制且重复性高的烫伤动物模型制作方法。通过干细胞移植证明BMSCs能促进创面愈合；皮肤肥大细胞糜蛋白酶可能参与了创面愈合过程。
[Abstract]:Objective : To establish a stable method for the treatment of skin deep 鈪

本文编号：1752927