金黄色葡萄球菌蛋白A在大肠杆菌中的自诱导表达以及单克隆抗体的制备

发布时间：2018-04-25 03:37

  本文选题：金黄色葡萄球菌蛋白A + 单克隆抗体　； 参考：《粮食科技与经济》2016年04期

【摘要】：利用大肠杆菌表达金黄色葡萄球菌蛋白A,根据大肠杆菌密码子偏好性对金黄色葡萄球菌蛋白(SPA)基因进行密码子优化。SPA基因插入p ET28a表达载体中,利用自诱导培养基诱导SPA表达,表达量达8.2 mg/L。通过Ni亲和层析纯化SPA蛋白,纯度达到95%。纯化的SPA蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,间接ELISA法检测抗体效价,抗体效价可达1∶40000,采用Protein G亲和层析纯化SPA单抗,纯度达98%。纯化后的SPA单抗检测与食品中常见的致病菌无交叉反应。结果显示,SPA单抗特异性良好,与其他致病菌无交叉反应。
[Abstract]:Staphylococcus aureus protein A was expressed in Escherichia coli. According to the codon preference of Escherichia coli, the codon of Staphylococcus aureus protein spa gene was optimized for insertion into p ET28a expression vector, and SPA expression was induced by self-induction medium. The expression reached 8.2 mg / L. The purity of SPA protein was 95% by Ni affinity chromatography. Monoclonal antibody was prepared by immunizing mice with purified SPA protein. The titer of antibody was detected by indirect ELISA method. The titer of antibody was up to 1: 40000.The monoclonal antibody of SPA was purified by Protein G affinity chromatography, and the purity was 98%. The purified SPA McAbs did not cross react with common pathogenic bacteria in food. The results showed that SPA monoclonal antibody had good specificity and had no cross reaction with other pathogenic bacteria.
【作者单位】： 北京华安麦科生物技术有限公司;北京市粮油食品检验所;
【基金】：北京市科委项目“即食食品中致病菌检测及快速检测技术研究与产品开发”(Z14110500260000)
【分类号】：R392.11

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