激素对人子宫内膜β1，4-半乳糖基转移酶Ⅰ表达的影响及与EGFR信号通路相关性研究

发布时间：2018-04-27 13:09

  本文选题：β1 + 4-GalT-Ⅰ　； 参考：《大连医科大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：探讨雌、孕激素作用下，着床前子宫内膜（RL95-2细胞）β1,4-GalT-I表达变化及对胚胎与子宫内膜黏附的影响，分析不同雌、孕激素作用下对EGFR相关信号通路表达的影响，调控子宫内膜β1,4-GalT-I表达后EGFR表达的相应变化，进一步分析子宫内膜β1,4-GalT-I调控胚胎着床的分子机制，探讨与EGFR信号通路的相关性。 方法：（1）通过体外着床模型（以人子宫内膜癌细胞RL95-2模拟着床前子宫内膜，以人绒毛癌细胞JAR模拟着床前胚胎），改变子宫内膜环境雌、孕激素的水平：免疫印迹技术检测雌、孕激素对子宫内膜β1,4-GalT-Ⅰ表达的影响，免疫细胞化学染色分析雌、孕激素对β1,4-GalT-Ⅰ半乳糖基化的改变；RCA-1Lectin-blot技术分析雌、孕激素作用下Galβ1-4GlcNAc糖蛋白分支形成情况；检测雌、孕激素影响子宫内膜EGFR相关信号通路蛋白表达水平；免疫印迹技术分析孕激素水平与p-EGFR表达相关性；计数JAR细胞在RL95-2细胞上黏附率，分析与雌、孕激素水平的关系；（2）将β1,4-GalTⅠ基因过表达质粒、干扰质粒、空质粒和干扰对照质粒分别转染RL95-2细胞，分析调控子宫内膜β1,4-GalTⅠ表达水平后，，JAR细胞在RL95-2细胞上黏附变化情况；应用免疫印迹技术分析调控子宫内膜β1,4-GalTⅠ表达对EGFR表达的影响。 结果：（1）子宫内膜β1,4-GalT-Ⅰ表达与雌、孕激素呈剂量、时间-效应关系，雌激素最佳作用条件为10-4ug/ul、48h（P0.01），孕激素最佳作用条件为10-4ug/ul、48h（P0.01）;（2）子宫内膜雌、孕激素可促进JAR细胞对RL95-2细胞的黏附作用，黏附率：雌激素组（84.7±0.4%）、孕激素组（91.4±0.7%）、雌孕联合组（88.0±0.9%），均明显高于正常组（78.3±0.7%）（P0.01），以孕激素上调作用更为显著；孕激素组、雌孕联合组可明显上调子宫内膜EGFR、NF-κB、ICAM-1和Galβ1-4GlcNAc的表达（P0.01）；雌激素组、孕激素组、雌孕联合组明显上调β1,4-GalT-Ⅰ、EGF蛋白表达（P0.01）；（3）孕激素作用下促进子宫内膜EGFR磷酸化水平（P0.01）；（4）子宫内膜细胞转染β1,4-GalTⅠ基因调控质粒后，JAR细胞在RL95-2细胞上的黏附率分别为：过表达组(90.5±1.3%)高于正常组(77.9±0.9%)、空载体组(79.0±1.9%)和干扰对照组(80.1±1.6%)，干扰组黏附率则显著降低（55.2±0.6%）（P0.01）；同时检测到干扰组EGFR表达水平上调，过表达组无明显变化（P0.01）。 结论：（1）雌、孕激素可调节子宫内膜细胞β1,4-GalT-Ⅰ的表达（呈现时间、剂量依赖关系），促进JAR细胞对RL95-2细胞的黏附作用；（2）孕激素可上调子宫内膜细胞EGFR相关信号通路分子表达来调控胚胎着床。（3）调控β1,4-GalT-Ⅰ表达影响胚胎着床可能通过EGFR相关信号通路。
[Abstract]:Objective: to investigate the changes of 尾 _ 1N _ 4-GalT-I expression and its effect on the adhesion of embryo to endometrium under the action of estrogen and progesterone, and to analyze the effect of different estrogen and progesterone on the expression of EGFR related signal pathway in RL95-2 cells. The corresponding changes of EGFR expression after regulating the expression of 尾 _ 1O _ 4-GalT-I in endometrium were studied. The molecular mechanism of 尾 _ 1N _ 4-GalT-I regulating embryo implantation was further analyzed, and the correlation with EGFR signaling pathway was discussed. Methods in vitro implantation model (human endometrial carcinoma cell RL95-2 was used to simulate preimplantation endometrium, human villous cancer cell JAR was used to simulate preimplantation embryo) to change the level of estradiol and progesterone: Western blot technique was used to detect the level of progesterone. The effects of progesterone on the expression of 尾 _ 1N _ 4-GalT- 鈪

本文编号：1810862