氨基端前B型钠尿肽单克隆抗体的制备及其鉴定
本文选题：氨基端前B型钠尿肽 + 单克隆抗体 ； 参考：《中国老年学杂志》2017年03期
【摘要】：目的通过经典单克隆抗体制备技术制备氨基端前B型钠尿肽(NT-pro BNP)单克隆抗体,将单克隆抗体进行特异性和亲和力鉴定,并用于免疫学检测试剂盒的开发。方法用带His-Trx-标签蛋白的NT-pro BNP免疫Balb/C小鼠制备单克隆抗体。使用PEG1500化学融合法将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用不带标签的NT-pro BNP对获取的杂交瘤细胞进行反复多次克隆筛选,将稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株经腹腔注射Balb/C小鼠诱导产生腹水,经蛋白G亲和纯化后获得NT-pro BNP单克隆抗体并对其进行亲和力和特异性进行鉴定。结果成功进行细胞融合并获得4株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体分泌亚型为Ig G1,可特异性识别NT-pro BNP。经腹腔体内诱生法和蛋白G亲和纯化,获得高质量NT-pro BNP单克隆抗体,经ELISA检测抗体效价在1∶10~5以上。结论通过传统经典单克隆抗体制备技术成功制备NT-pro BNP单克隆抗体,为NT-pro BNP检测试剂盒的研发奠定了基础。
[Abstract]:Objective to prepare the NT-pro BNPs monoclonal antibody with amino terminal B type natriuretic peptide by classical monoclonal antibody preparation technique, and to identify the specificity and affinity of the monoclonal antibody, and to develop a kit for immunological detection. Methods NT-pro BNP with His-Trx- tag protein was used to immunize Balb/C mice to prepare monoclonal antibody. Mouse spleen cells and myeloma cells (SP2/0) were fused by PEG1500 chemical fusion method. Unlabeled NT-pro BNP was used to clone and screen the hybridoma cells repeatedly and repeatedly. The hybridoma cell lines secreting stable antibodies were induced to produce ascites by intraperitoneal injection of Balb/C mice. Monoclonal antibody (McAb) of NT-pro BNP was obtained by affinity purification of protein G, and its affinity and specificity were identified. Results four hybridoma cell lines secreting monoclonal antibody stably were successfully fused. The secretory subtype of antibody was Ig G1, which could specifically recognize NT-pro BNPs. High quality monoclonal antibody of NT-pro BNP was obtained by induction and affinity purification of protein G in abdominal cavity. The titer of antibody detected by ELISA was more than 1: 10 ~ (5). Conclusion NT-pro BNP monoclonal antibody was successfully prepared by classical monoclonal antibody preparation technique, which laid a foundation for the development of NT-pro BNP detection kit.
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院检验科;
【基金】：国家自然科学基金项目(31270984)
【分类号】：R392-33
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，本文编号：1910819
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