铜绿假单胞菌凝集素PA-ⅠL的纯化表达及活性评价

发布时间：2018-05-28 18:26

  本文选题：铜绿假单胞菌 + PA-ⅠL蛋白　； 参考：《军事医学》2017年03期

【摘要】：目的构建铜绿假单胞菌凝集素PA-ⅠL基因的重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达并评价其生物学活性。方法以铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板设计引物,构建p ET-28a(+)-PA-ⅠL重组表达质粒,转化至大肠杆菌中诱导表达,用Ni亲和层析法对目的蛋白进行纯化。流式细胞术评价重组表达的PA-ⅠL蛋白对细胞表面Gb3/CD77的结合活性,菌落平板计数法评价重组蛋白在细菌黏附宿主细胞过程中的功能。结果与结论 SDS-PAGE电泳显示,纯化后的PA-ⅠL蛋白具有较高的纯度,重组表达的PA-ⅠL蛋白能与细胞表面的糖鞘脂Gb3/CD77结合,且呈浓度依赖性抑制PA的PAO1对宿主细胞的黏附。
[Abstract]:Objective to construct the recombinant expression plasmid of Pseudomonas aeruginosa lectin PA- I L gene, and to express and evaluate its biological activity in Escherichia coli BL21 (DE3). Methods the primers were designed with PAO1 genome of Pseudomonas aeruginosa as a template, and P ET-28a (+) -PA- I L recombinant expression plasmid was constructed and transformed into Escherichia coli to induce expression, and Ni affinity layer was used. Purification of the target protein. Flow cytometry was used to evaluate the binding activity of the recombinant PA- I L protein on the cell surface Gb3/CD77. The function of the recombinant protein in the process of bacterial adhesion to the host cell was evaluated by the colony plate counting method. Results and conclusion SDS-PAGE electrophoresis showed that the purified PA- I L protein was highly purified and reorganized. The expression of PA- I L protein can bind to glycolipid Gb3/CD77 on the cell surface and inhibit the adhesion of PA PAO1 to host cells in a concentration dependent manner.
【作者单位】： 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室;中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室;
【分类号】：R378.991

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本文编号：1947728