人IL-37b在大肠埃希菌中的表达、纯化及活性鉴定

发布时间：2018-06-02 00:15

  本文选题：IL-b + 表达　； 参考：《中国比较医学杂志》2017年03期

【摘要】：目的表达重组IL-37b蛋白并去除内毒素,鉴定其活性。方法构建原核表达载体p ET28/IL-37b,转化大肠杆菌感受态细胞;经IPTG诱导表达的重组蛋白由Ni2+-NTA凝胶进行变性条件下的亲和层析纯化;用SDS-PAGE分析、考马斯亮蓝染色鉴定重组蛋白是否为目的蛋白;去除蛋白中原核表达所产生的内毒素;将蛋白作用于受LPS刺激的RAW 264.7细胞,收集培养上清,通过ELISA方法检测IL-6的表达水平,鉴定蛋白的生物学活性。结果表达了纯度较好的重组IL-37b蛋白,降低了其中原核表达所产生的内毒素,经鉴定其具备良好的生物学活性。结论成功表达了具备良好生物学活性的IL-37b蛋白。
[Abstract]:Objective to express recombinant IL-37b protein, remove endotoxin and identify its activity. Methods the prokaryotic expression vector pET28 / IL-37b was constructed and transformed into Escherichia coli receptive cells. The recombinant protein induced by IPTG was purified by affinity chromatography under denaturation conditions by Ni2 -NTA gel. Coomassie brilliant blue staining was used to identify whether the recombinant protein was the target protein; to remove the endotoxin produced by prokaryotic expression in the protein; to act the protein on the RAW 264.7 cells stimulated by LPS; to collect the culture supernatant; and to detect the expression level of IL-6 by ELISA method. To identify the biological activity of the protein. Results the recombinant IL-37b protein with good purity was expressed and the endotoxin produced by prokaryotic expression was reduced. Conclusion IL-37b protein with good biological activity was successfully expressed.
【作者单位】： 中国医学科学院医学实验动物研究所;
【基金】：中央级公益性科研院所基本科研业务费
【分类号】：R378

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：1966367