外源性CNTF和IGF-1对大鼠MDSCs增殖的影响

发布时间：2018-06-06 10:05

  本文选题：MDSCs + IGF-1　； 参考：《吉林大学》2011年硕士论文

【摘要】：有关研究表明,肌源性干细胞(muscle derived stem cells, MDSCs)可能是一种新的骨骼肌源性成体干细胞,在组织工程和基因治疗中具有广泛的应用前景。目前,MDSCs的研究存在许多热点问题,如何获取满足实验及将来临床所需的MDSCs数量就是其中一个亟待解决的难题。许多学者认为利用生长因子扩增的方法是一种良好的选择,有关研究正在进行中。本文进行的有关研究,旨在进一步探讨MDSCs的扩增条件,为有关研究与应用奠定实验基础。本实验通过酶消化法分离大鼠MDSCs,再通过密度梯度离心法和差速贴壁法纯化,然后将获取的MDSCs进行体外培养,并通过免疫细胞化学法(desmin、Sca-1)对所获得的细胞进行鉴定。最后通过MTT法检测不同浓度(6.25、12.5、25、50、100ng/ml)的IGF-1和CNTF单独应用96h以及二者联合作用(100ng/ml)24h、48h、72h和96h的光吸收值(OD)。所得数据通过SPSS13统计软件包进行分析,数据以均数±标准差表示,组间比较采用方差分析,两两比较采用Tukey’s法, P值0.05为有统计学意义。结果表明： 1.实验组(分别加入不同浓度的IGF-1和CNTF)的光吸收值(OD)均高于阴性对照组,但在6.25ng/ml组,CNTF和IGF-1对MDSCs的促增殖效应不显著。在12.5ng/ml组,两种因子对MDSCs的促增殖效应明显增强(P0.05)；但二者的促增殖效应没有明显差异。在25ng/ml组,CNTF和IGF-1对MDSCs的促增殖作用不仅进一步增强,而且两者间存在显著性差异(P0.05)。在50ng和100ng/ml组,CNTF和IGF-1的促MDSCs增殖效应均接近顶峰,并出现平台现象。 2.随着培养时间的延长,不同时间点的光吸收值出现明显差异。以阴性对照组为参照,在体外培养过程中出现显著性促增殖效应(P0.05)的时间分别为：96h(IGF-1组)、72h (CNTF组)、48h (IGF-1+CNTF组)。24h内,实验因素的促增值效应不明显,不存在显著性差异。 3.在48h-96h期间,联合组(IGF-1和CNTF)促MDSCs的增殖效应最强,并与其它实验组间存在显著差异(P0.05) 4.免疫细胞化学结果显示：培养4d,呈Sca-1阳性反应的MDSCs较多,阳性率达90%。而Desmin阳性反应的MDSCs数量较少。 本实验提示：CNTF和IGF-1均具有一定的促大鼠MDSCs增殖效应,而且存在协同增效现象。但是单独作用时,二者促MDSCs增殖的显效时间存在显著差异,而且在6.25ng/ml, 12.5ng/ml,25ng/ml,50ng/ml组,促MDSCs增殖作用还呈浓度依赖性。有关作用机制至今还不清楚。
[Abstract]:It is suggested that muscle derived stem cells, MDSCs) may be a new type of skeletal muscle derived adult stem cells, which may be widely used in tissue engineering and gene therapy. At present, there are many hot problems in the research of MDSCs, and how to obtain the quantity of MDSCs needed in the experiment and in the future is one of the problems to be solved urgently. Many scholars believe that the method of growth factor amplification is a good choice. The purpose of this paper is to further study the conditions of MDSCs amplification, and to lay an experimental foundation for the study and application. Rat MDSCs were isolated by enzyme digestion and purified by density gradient centrifugation and differential adherence method. The obtained MDSCs was cultured in vitro and identified by immunocytochemical method (Sca-1). Finally, IGF-1 and CNTF with different concentrations of 6.25g / ml (12.5ng / ml) and CNTF (50ng / ml) were detected by MTT method for 96h alone, and the optical absorption values of 100ng / ml / ml ~ (24) h ~ (24) h ~ (48) h ~ (72) h ~ (-1) ~ 96 h ~ (-1) were determined. The data were analyzed by SPSS13 statistical software package, the data were expressed as mean 卤standard deviation, the analysis of variance was used in the comparison between groups, and the Tukey's method was used in the pairwise comparison (P < 0. 05). The results show that: 1. The light absorption values of the experimental group (adding different concentrations of IGF-1 and CNTF) were higher than those of the negative control group, but the proliferation effect of CNTF and IGF-1 on MDSCs was not significant in the 6.25ng/ml group. In 12.5ng/ml group, the proliferative effect of two kinds of factors on MDSCs was significantly enhanced, but there was no significant difference between them. In 25ng/ml group, the effects of CNTF and IGF-1 on the proliferation of MDSCs were not only further enhanced, but also significantly different between the two groups (P 0.05). In both 50ng and 100ng/ml groups, the proliferative effect of CNTF and IGF-1 on MDSCs was near the peak, and the phenomenon of platform appeared. 2. With the extension of culture time, the light absorption values at different time points were obviously different. Taking negative control group as reference, the time of significant proliferative effect (P0.05) appeared in vitro culture process was 10 / 96h / h IGF-1 group respectively. The effect of the experimental factors was not obvious and there was no significant difference within 48 h and 24 h after treatment with IGF-1 CNTF group (n = 72 h) and IGF-1 / IGF-1 group (P < 0.05), respectively, and there was no significant difference between the experimental factors and the control group (P < 0.05). 3. During 48h-96h, IGF-1 and CNTF-1 had the strongest proliferative effect on MDSCs, and there was significant difference with other experimental groups (P0.05). 4. The results of immunocytochemistry showed that there were more MDSCs with Sca-1 positive reaction at 4 days, and the positive rate was 90. However, the number of Desmin positive MDSCs was relatively small. The results showed that both IGF-1 and IGF-1 could promote the proliferation of MDSCs in rats, and there was a synergistic effect. However, there was a significant difference between the two groups in promoting the proliferation of MDSCs in a dose-dependent manner in the 6.25ng / ml, 12.5ng / ml, 25ng / ml and 50ng / ml groups. The mechanism of action is still unclear.
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329.1

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本文编号：1986145