转座子与整合子遗传标记在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中相关性探讨

发布时间：2018-06-24 00:31

  本文选题：大肠埃希菌 + 多重耐药　； 参考：《泸州医学院》2011年硕士论文

【摘要】：目的：了解本地产超广谱β—内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamases, ESBLs)大肠埃希菌(Escherichia coli)的耐药情况,探讨转座子与整合子遗传标志在耐多药产ESBLs大肠埃希菌中的作用。方法：1.初步筛选试验(Screening test):选用头孢噻肟、头孢他啶、氨曲南、头孢曲松药敏纸片对71株大肠埃希菌进行产ESBLs筛选试验,凡头孢他啶的抑菌环直径≤22 mm,头孢曲松≤25 mm,氨曲南或头孢噻肟≤27 mm,则提示为可疑产ESBLs菌株。2.纸片确认试验(Confirmatory tests):将初筛可疑产ESBLs菌株同时用头孢他啶和头孢他啶加克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟加克拉维酸作药敏试验,对任何一组药物,加克拉维酸前后抑菌环直径相差≥5mm可确认为产ESBLs菌株。3.药敏试验：纸片扩散法(Kerby-Bauer法,K-B法),采用NCCLS推荐的方法测定71株大肠埃希菌对三类6种常用抗菌药物—链霉素(S)、阿米卡星(A)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LEV)、头孢噻肟(CTX)、头孢西丁(FOX)的耐药性。采用大肠埃希菌标准菌株ATCC 25922进行质控。4.PCR技术：采用Biospin细菌基因组DNA试剂盒提取大肠埃希菌DNA。根据qacE△1-sul1基因(Ⅰ类整合子遗传标记)、merA(为转座子Tn21和Tn501共同的遗传标记)、tnpA(为转座子Tn1、Tn2、Tn3和Tn1000共同的遗传标志)、tnpU(为转座子Tn1548遗传标)设计四对引物,以提取的大肠埃希菌DNA为反应模板进行PCR扩增。将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳、紫外线检测仪观察结果及送检做基因测序。结果：1.产ESBLs菌株的检测结果：临床分离的71株大肠埃希菌表型筛选试验初步筛出可疑产ESBLs 55株(77.46%),进一步确认试验共检出产ESBLs35株(49.30%)。2.临床分离株对6种抗生素耐药分布：(1)耐S 41株、耐A 6株、耐LEV 45株、耐CIP 51株、耐CTX 44株、耐FOX 9株；(2)耐药模式分布：多耐模式45株(63.38%)、双耐8株(11.27%)、单耐11株(15.49%)、全敏感菌株7株(9.86%)。3.转座子的检出：PCR法检出遗传标记merA阳性菌共15株(21.13%),而转座子tnpA和tnpU均未检出。不同耐药模式中转座子遗传标记merA检出率的比较有统计学差异(P0.05)。产ESBLs酶菌株中不同耐药模式中转座子遗传标记merA检出率的比较有统计学差异(P0.05)；非产ESBLs酶菌株中不同耐药模式中转座子遗传标记merA检出率的比较无统计学差异(P0.05)。4.整合子遗传标记(qacE△1-sul1)的检出：PCR法共检出55株(77.46%),其中多耐模式菌株检出率最高为88.89%(40株),其次为双耐模式75%(6株),单耐模式中检出率最低为22.22%(2株),不同耐药模式中整合子遗传标记检出率有统计学差异(P0.05)。产ESBLs酶菌株中不同耐药模式的整合子遗传标记检出率有统计学差异(P0.05)；非产ESBLs酶菌株不同耐药模式中整合子遗传标记检出率无统计学差异(P0.05)。5.转座子阳性株中整合子检出情况：共检出10株(66.67%),其中多耐模式中两者重叠率最高为80%(8株)、双耐20%(2株)。6.转座子遗传标记merA在产ESBLs酶且整合子阳性菌株中的检出：共检出6株,其中多耐模式4株,双耐2株,单耐未检出。不同耐药模式中检出率有统计学差异(P0.05)。结论：1.本地区大肠埃希菌耐药情况严重,产ESBLs酶菌株常见,并以多耐模式菌株为主；2.转座子、整合子的分布以耐多药模式菌株为主；3.同时携带整合子和转座子基因的菌株多表现为耐药,尤其在耐多药模式中更为明显；4.产ESBLs酶且同时携带转座子、整合子基因的菌株主要分布在耐多药模式菌株中,该三者在多重耐药机制中可能存在一定的联系。
[Abstract]:Objective : To investigate the drug resistance of Escherichia coli with extended spectrum beta - lactamase ( extended spectrum beta - lactamase ) . 71 strains of Escherichia coli were isolated from clinical isolates ( 77.46 % ) . There were 35 strains ( 49.30 % ) of ESBLs35 strains ( 49.30 % ) .
( 2 ) The distribution of resistance patterns : 45 strains ( 63.38 % ) , 8 ( 11.27 % ) , 11 ( 15.49 % ) and 7 ( 9.86 % ) .
There was no statistical difference ( P0.05 ) . There were 55 strains ( 77.46 % ) detected by polymerase chain reaction ( PCR ) in different drug resistance patterns of non - producing - producing strains ( P0.05 ) . The detection rate of multi - resistant strains was 88.89 % ( 40 strains ) , and the detection rate was 22 . 22 % ( 2 strains ) .
There was no statistical difference in the detection rate of integron in non - producing - producing strains ( P0.05 ) . Among them , 10 strains ( 66.67 % ) were detected . Among them , 10 strains ( 66.67 % ) were detected . Among them , 6 strains were detected . Among them , 6 strains were detected , 4 of them were resistant to multi - resistance , 2 strains were resistant to double - resistant strains .
2 . The distribution of transposon and integron was mainly resistant to multi - drug - resistant strain .
3 . At the same time , the strains carrying both the integron and the transposon genes showed resistance , especially in the multi - drug - resistant model ;
4 . It is possible to have a certain relationship among the multiple drug resistance mechanisms in the strains of multi - drug resistance , which is mainly distributed among the strains of multi - drug resistance .
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R378

【参考文献】

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本文编号：2059150