组织蛋白酶L介导Ox-LDL诱导单层HUVECs通透性增加及其机制探讨

发布时间：2018-06-25 11:07

  本文选题：组织蛋白酶L + 氧化低密度脂蛋白　； 参考：《南华大学》2012年硕士论文

【摘要】：【目的】 观察组织蛋白酶L（cathepsin L,CATL）在氧化低密度脂蛋白（oxidized lowdensity lipoprotein, Ox-LDL）诱导单层脐静脉内皮细胞（HUVECs）通透性增加中的作用及其机制探讨。 【方法】 （1）用不同浓度Ox-LDL处理HUVECs24h，Transwell和荧光分光光度法检测HUVECs通透性变化；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印记技术（Western blot）分别检测HUVECs CATL、TET2、VE-cadherin、自噬和凋亡指标的mRNA及蛋白表达情况；用CATL活性检测试剂盒检测HUVECs CATL活性水平；MDC染色观测HUVECs自噬水平，Hochest染色和流式细胞术检测HUVECs凋亡水平。 （2）用不同浓度CATL inhibitor预孵育HUVECs24h，再加入50mg/LOx-LDL处理24h，检测指标同前（1）。 （3）用TET2siRNA转染HUVECs，Western blot检测Beclin-1、LC3、Caspase-3和VE-cadherin蛋白表达。 【结果】 （1）用Ox-LDL（0、25、50和75mg/L）处理HUVECs，实验结果显示：随着Ox-LDL浓度的增加，CATL mRNA表达差异无统计学意义（P0.05），，但其蛋白表达及活性显著增加（P0.01）；VE-cadherin蛋白表达减少(P0.05)，单层HUVECs通透性增加(P0.05)。Beclin-1mRNA和蛋白表达明显增加，LC3mRNA表达差异无显著性，但LC3Ⅰ/LC3Ⅱ明显增加；MDC染色结果显示自噬囊泡染色增加；Caspase-3mRNA表达在50mg/L Ox-LDL组显著上调（P0.001）；Ox-LDL处理组Caspase-3蛋白表达显著高于对照组（P0.05）；Caspase-9mRNA表达差异无统计学意义（P0.05）；Bcl-2mRNA表达呈Ox-LDL处理浓度依赖性降低（P0.01）；Hochest染色和流式细胞术结果显示Ox-LDL促进HUVECs凋亡。 （2）用不同浓度CATL inhibitor预孵育HUVECs24h，再加入50mg/LOx-LDL处理24h，实验结果显示：随着CATL inhibitor预处理浓度的增加，Ox-LDL诱导的单层HUVECs通透性降低（P0.01）；VE-Cadherin表达增加（P0.01）；Beclin-1和LC3mRNA表达差异不显著（P0.05），Beclin-1蛋白表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ降低（P0.01）；MDC染色结果显示自噬囊泡减少；Caspase-3mRNA和蛋白表达上调（P0.05），Caspase-9mRNA表达差异无显著性（P0.05）； Bcl-2mRNA表达增加（P0.01）；Hoechst染色和流式细胞术结果显示CATL inhibitor上调Ox-LDL诱导的HUVECs凋亡。 （3）Ox-LDL呈剂量依赖性下调TET2mRNA和蛋白表达（P0.05），CATLinhibitor呈剂量依赖性上调Ox-LDL处理的HUVECs TET2mRNA和蛋白表达。TET2siRNA显著上调HUVECs Beclin-1蛋白表达（P0.001）和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ（P0.01）， TET2siRNA下调HUVECs Caspase-3蛋白表达（P0.01）；但TET2siRNA对HUVECs VE-Cadherin蛋白表达差异无统计学意义（P0.05）。 【结论】 CATL介导Ox-LDL对血管内皮细胞自噬和凋亡的调节以及内皮细胞单层通透性的改变，TET2参与此过程。
[Abstract]:[objective] to investigate the effect of cathepsin L (cathepsin L) on the permeability of monolayer umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by oxidized low density lipoprotein (oxidized lowdensity lipoprotein,) and its mechanism. [methods] (1) HUVECs were treated with different concentrations of Ox-LDL for 24 h and the permeability of HUVECs was detected by fluorescence spectrophotometry. Reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot were used to detect the mRNA and protein expression of HUVECs, autophagy and apoptosis, and the activity of HUVECs CATL was detected by CATTL assay kit. (2) HUVECs were preincubated with different concentrations of CATL inhibitor for 24 h, then treated with 50 mg / L Ox-LDL for 24 h. The detection indexes were detected by Tet 2siRNA transfected HUVECs blot with 1). (3 for 24 h. [results] (1) HUVECs were treated with Ox-LDL (0 ~ 2550 mg / L and 75 mg / L). The results showed that there was no significant difference in the expression of CATL mRNA with the increase of Ox-LDL concentration (P0.05), but its protein expression and activity increased significantly (P0.01). The expression of VE-cadherin protein decreased (P0.05), the permeability of monolayer HUVECs increased (P0.05) .Beclin-1 mRNA and protein expression increased significantly, but LC3 鈪

本文编号：2065702