荧光共振能量转移法对细胞cAMP含量的实时检测

发布时间：2018-06-27 13:40

  本文选题：荧光共振能量转移 + c　； 参考：《安徽医科大学学报》2017年11期

【摘要】：大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)转染pc DNA3-ICUE3质粒,用荧光共振能量转移(FRET)法观察前列腺素(PGE2)刺激下大鼠FLS环磷酸腺苷(c AMP)水平的实时变化,与放免法检测进行比较。FRET检测到FLS在PGE2刺激后1 min,c AMP升高14.93%,且不同批次实验差异较小;放免法检测到c AMP升高7.79%;FRET可检测到PGE2受体拮抗剂对c AMP产生的抑制,可观察到1 nmol/L PGE2促进c AMP产生,放免法检测PGE2产生效应最低浓度为0.1μmol/L。提示FRET法检测灵敏、重复性高,为G蛋白偶联受体信号通路研究的可靠技术手段。
[Abstract]:Rat fibroblast synovial cells (FLS) were transfected with pcDNA3-ICUE3 plasmid. The real-time changes of the level of cyclic adenosine monophosphate (c-AMP) were observed by fluorescence resonance energy transfer (fret) in rats stimulated by prostaglandin (PGE2). Compared with radioimmunoassay, FLS increased camp by 14.93% at 1 min after PGE2 stimulation, and showed little difference in different batches of experiments, and the inhibition of camp production by PGE2 receptor antagonist was detected by radioimmunoassay by 7.79% FRET. It was observed that 1 nmol / L PGE2 promoted the production of camp, and the lowest concentration of PGE2 production by radioimmunoassay was 0.1 渭 mol 路L ~ (-1) 路L ~ (-1) 路L ~ (-1) 路L ~ (-1). The results suggest that fret method is sensitive and reproducible, which is a reliable technique for the study of G protein coupled receptor signaling pathway.
【作者单位】： 安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室安徽抗炎免疫药物协同创新中心;
【基金】：国家自然科学基金(编号:81173075、81330081、81202541) 安徽省自然科学基金(编号:1208085QH146) 安徽医科大学青年拔尖人才支持计划(2013) 安徽医科大学第三批中青年学术技术带头人
【分类号】：R3416

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本文编号：2074096