PPARγ激动剂和全反式维甲酸对间充质干细胞成骨分化的影响

发布时间：2018-07-24 15:21

【摘要】：实验目的： 研究PPARγ激动剂和全反式维甲酸对间充质干细胞骨向分化的影响及可能机制。 实验方法： 采用化学发光法、PCR、Western blot、报告质粒等技术,研究PPARγ受体激动剂曲格列酮与全反式维甲酸对间充质干细胞骨向分化的影响。具体方法如下： 1.检测单独及联合使用曲格列酮(Tro)和/或全反式维甲酸(ATRA)后,早期成骨指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)的活性变化。 2.检测单独及联合使用Tro和/或ATRA后,矿化基质沉积的变化。 3.从基因表达水平和蛋白质表达水平检测单独及联合使用Tro和/或ATRA后,MEFs细胞成骨晚期指标骨桥素(osteopontin, OPN),骨钙素(osteocalcin, OC)的表达情况。 4.利用重组腺病毒技术,过表达及干扰PPARy2基因,检测Tro和/或ATRA对MEFs细胞碱性磷酸酶活性的影响。 5.利用报告质粒及Western blot,检测使用Tro和/或ATRA对BMPR-Smad信号通路转录活性的影响。 6.利用Oil-red染色及Western blot,检测Tro和/或ATRA对MEFs细胞成脂分化的影响。 实验结果： 1.Tro和ATRA联合应用增强MEFs细胞ALP活性。 2.Tro和ATRA联合应用增强MEFs细胞矿化基质沉积。 3.Tro和ATRA联合应用增加MEFs细胞OPN及OC的表达。 4.过表达PPAR/2基因,可以增强Tro和ATRA联合诱导的MEFs细胞ALP活性。 5.Tro和ATRA联合应用能激活BMPR-Smad信号通路。 6.Tro和ATRA联合应用能抑制Tro诱导MEFs细胞成脂分化。 实验结论： Tro与ATRA联合应用能明显诱导MEFs细胞成骨分化。这种作用可能与增强BMPR-Smad信号转录活性及抑制MEFs细胞成脂分化有关,具体机制有待进一步研究。
[Abstract]:Aim: to study the effect of PPAR 纬 agonist and all trans retinoic acid on bone differentiation of mesenchymal stem cells and its possible mechanism. Methods: the effects of trasiglitazone, a PPAR 纬 receptor agonist, and all trans retinoic acid on bone differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) were studied by chemiluminescent technique. The specific methods are as follows: 1. The activity of alkaline phosphatase (alkaline phosphatase, ALP), an early osteogenic index, was detected after trioglitazone (Tro) and / or all trans retinoic acid (ATRA) were used alone or in combination. 2. The changes of mineralized matrix deposition after using Tro and / or ATRA alone and in combination were detected. 3. 3%. The expression of osteopontin (osteopontin, OPN),) and osteocalcin (osteocalcin, OC) in Tro and / or ATRA cells were detected by gene expression level and protein expression level. 4. The effects of Tro and / or ATRA on alkaline phosphatase activity in MEFs cells were detected by overexpressing and interfering with PPARy2 gene by recombinant adenovirus technique. The effects of Tro and / or ATRA on the transcriptional activity of BMPR-Smad signaling pathway were detected by using reporter plasmids and Western blotts. The effects of Tro and / or ATRA on the adipogenic differentiation of MEFs cells were detected by Oil-red staining and Western blot. The results showed that the combination of 1.Tro and ATRA enhanced the ALP activity of MEFs cells, 2.Tro and ATRA enhanced the deposition of mineralized matrix of MEFs cells, and 3.Tro and ATRA increased the expression of OPN and OC in MEFs cells. Overexpression of PPAR/2 gene could enhance the ALP activity of MEFs cells induced by Tro and ATRA. The combination of 5.Tro and ATRA could activate BMPR-Smad signaling pathway. 6.Tro and ATRA combined with ATRA could inhibit Tro induced MEFs cell adipogenic differentiation. Conclusion: the combination of Tro and ATRA can induce the osteogenic differentiation of MEFs cells. This effect may be related to enhancing the transcriptional activity of BMPR-Smad signal and inhibiting the adipogenic differentiation of MEFs cells.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329.2

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 邓江;黄文良;阮世强;苑成;佘荣峰;;胰岛素样生长因子-Ⅰ活化组织工程骨修复骨缺损的实验研究[J];第三军医大学学报;2011年02期

2 史立群;陈晓亮;李希宁;徐辉;李广生;;投氟对大鼠胰岛素水平的影响[J];中国地方病防治杂志;2013年05期

3 姚兆友;何倩婷;刘中华;赵婷婷;王安训;;维甲酸诱导腭裂发生中转化生长因子-β信号通路相关分子表达的研究[J];广东牙病防治;2013年11期

4 王春玉;龙丰云;陈香;余希杰;;骨钙素介导的骨内分泌系统[J];中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志;2013年03期

5 李京宝;蔺潇;周虹;;糖皮质激素与骨[J];中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志;2013年04期

6 郁静嘉;赵红燕;;2型糖尿病与男性骨质疏松[J];中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志;2013年04期

7 赵晶蕾;江凌勇;房兵;;叉头框蛋白O1在骨改建中的作用[J];国际口腔医学杂志;2014年02期

8 孟红;刘倩;吴宁;蒋雪梅;何小艳;丁兀兀;;细胞视黄酸结合蛋白Ⅱ、表皮型脂肪酸结合蛋白及Ki-67在乳腺浸润性导管癌中的表达及相关性[J];华西医学;2013年09期

9 罗林;白刚;王行桥;倪炜;左频;袁红平;牛华涛;范耀东;;颅咽管瘤中RARα及PPARβ/δ表达与RA作用的相关性[J];昆明医科大学学报;2013年10期

10 刘倩;吴宁;孟红;丁兀兀;何小艳;易瑛;;乳腺浸润性导管癌中CRABPⅡ和E-FABP的表达及其意义[J];临床与实验病理学杂志;2013年09期

相关博士学位论文 前10条

1 杨万广;ALDH1A2在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞生物学的作用[D];郑州大学;2013年

2 丛蔚;利用维甲酸诱导及Wnt5a基因敲除两种颌面发育畸形模型研究腭裂及舌发育异常的分子调控机制及相关性[D];大连医科大学;2012年

3 关剑;胰腺癌间充质干细胞样肿瘤相关纤维母细胞功能研究及维甲酸对肿瘤相关纤维母细胞抑制性研究[D];北京协和医学院;2013年

4 张丽侠;替诺福韦酯对人骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其机制探讨[D];北京协和医学院;2013年

5 周霞;Fgfr2 S252W功能增强型突变对小鼠下颌骨及牙齿影响研究[D];第三军医大学;2013年

6 谢杨丽;FGFR3在骨骼发育、稳态维持中的作用与相关机制研究[D];第三军医大学;2013年

7 张嵬;hUC-MSC_S/hHGF基因修饰的hUC-MSC_S移植在心肌损伤修复中的实验研究[D];天津医科大学;2013年

8 冀X;ALPL基因突变影响ADRB2基因调控BMMSCs成骨分化的实验研究[D];第四军医大学;2013年

9 黎婷;猪DGAT1基因肌肉超表达转基因小鼠及克隆猪的检测验证[D];华中农业大学;2013年

10 朱云霞;高级糖基化终末产物（AGEs）对糖尿病胰岛β细胞损伤的作用研究[D];南京师范大学;2013年

相关硕士学位论文 前10条

1 冯长江;基于建立临床用细胞库的脐带间充质干细胞相关生物学特性研究[D];南方医科大学;2012年

2 张东丽;腺病毒介导的siRNA沉默β-catenin对人羊膜间充质干细胞增殖的影响[D];郑州大学;2013年

3 尹山兰;多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞PPARγ、P450arom表达及与IVF-ET结局关系研究[D];郑州大学;2013年

4 陈斌;人股动脉粥样硬化斑块中E-FABP与FAS的表达[D];郑州大学;2013年

5 赵晗;PPARγ-依赖性信号通路在类胡萝卜素联合罗格列酮抑制K562细胞增殖中的作用[D];郑州大学;2013年

6 李萌;2型糖尿病骨质疏松相关性研究[D];河北医科大学;2013年

7 刘黎;CVB3诱导不同性别BALB/c小鼠巨噬细胞差异性极化的机制[D];苏州大学;2013年

8 顾淑君;PPAR γ基因Prol2Ala、C1431T和C681G多态性与脂质指标的相关性研究[D];苏州大学;2013年

9 张金钮;GLP-1R、PKA在糖尿病骨质疏松大鼠肾组织中表达[D];河北医科大学;2013年

10 刘素新;内脂素、PPARγ在妊娠期糖尿病及正常妊娠妇女的表达[D];河北医科大学;2013年

，

本文编号：2141803