梅毒螺旋体Hsp10蛋白的原核表达与纯化

发布时间：2018-07-26 10:03

【摘要】：目的原核表达及纯化梅毒螺旋体(Treponema palludim,Tp)热休克蛋白10(Heat shock protein 10,Hsp10)。方法利用Clustal Omega软件对Tp与其他物种的Hsp10蛋白进行多序列比对并运用生物信息学方法分析Hsp10蛋白亲水性和结构。设计特异性引物,以Tp基因组为模板,PCR扩增Hsp10基因。回收PCR产物并用EcoRI和HindIII双酶切,酶切片段与同样酶切的质粒pET28a相连,构建表达重组质粒pET28a-Hsp10,转化大肠埃希菌BL21(DE3),采用IPTG诱导重组Hsp10蛋白表达,用镍离子柱纯化目的蛋白。结果 Tp Hsp10基因编码蛋白是一个亲水性蛋白,α-螺旋、无规卷曲和β片层分别占5.7%、47.7%和45.4%,三级结构与结核分枝杆菌Hsp10(PDB:1p3h.1.C)类似,可由7个Hsp10组成一个圆形结构。PCR扩增获得的Hsp10基因全长为267bp,连接到表达载体pET28a得到重组质粒pET28a-Hsp10,编码含His标签的重组Hsp10蛋白。重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达分子质量单位为13.7ku的重组Tp Hsp10蛋白,与理论值相符。重组蛋白经镍离子柱层析纯化,获得单一条带的Hsp10。结论成功构建重组质粒pET28a-Hsp10并表达和纯化获得Hsp10蛋白,为研究其功能奠定了基础。
[Abstract]:Objective to express and purify heat shock protein 10 (Heat shock protein 10 Hsp10 from Treponema palludimica pallidum. Methods Clustal Omega software was used to analyze the hydrophilicity and structure of Hsp10 protein from TP and other species. Specific primers were designed to amplify Hsp10 gene using TP genome as template. The recombinant plasmid pET28a-Hsp10 was constructed. The recombinant plasmid pET28a-Hsp10 was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3). IPTG was used to induce the expression of the recombinant Hsp10 protein, and the target protein was purified by nickel ion column. Results the protein encoded by TP Hsp10 gene was a hydrophilic protein, 伪 -helix, random coil and 尾 -lamella, accounting for 47.7% and 45.4%, respectively. The tertiary structure was similar to that of Mycobacterium tuberculosis Hsp10 (PDB:1p3h.1.C). The total length of Hsp10 gene was 267bp. it was ligated to the expression vector pET28a to obtain the recombinant plasmid pET28a-Hsp10, which encoded the recombinant Hsp10 protein containing His tag. The recombinant plasmid transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) induced the expression of recombinant TP Hsp10 protein with the molecular weight unit of 13.7ku, which was consistent with the theoretical value. The recombinant protein was purified by nickel ion column chromatography and a single band Hsp10 was obtained. Conclusion the recombinant plasmid pET28a-Hsp10 was successfully constructed, the Hsp10 protein was expressed and purified, which laid a foundation for the study of its function.
【作者单位】： 中南大学湘雅二医院检验科;湖南中医药高等专科学校附属第一医院检验科(湖南省直中医医院);中南大学基础医学院寄生虫学系;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(No.81371834) 湖南省科技厅项目(No.2014SK3068)
【分类号】：R377.1

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