马主要过敏原Equ c1的重组表达及其低过敏原性的改造

发布时间：2018-08-19 13:56

【摘要】：目的：分泌蛋白Equ c1是一种主要过敏原，能够在大多数对马过敏的病人体内诱发IgE调节的I型过敏反应，本文旨在探索重组低变应原性过敏原Equ c1的研究，为其在特异性免疫治疗方面的应用打下基础。方法：本研究在大肠杆菌中重组表达了经密码子优化之后的成熟肽区段的Equ c1，并对其进行表达条件的优化，亲和纯化和Western-Blot鉴定。利用MHCⅡ Service2.0软件对Equ c1的T细胞主要过敏原表位进行预测，用定点突变技术改变Equ c1编码特定氨基酸的密码子，，并在大肠杆菌中表达具有低抗原表位的重组蛋白，对其进行了三级结构的模拟和分析以及Western-Blot鉴定。结果：重组Equ c1-Rosetta菌株在加入浓度为1mmol/L的IPTG诱导剂0.5μL，37℃诱导表达6h条件下，能取得最优的蛋白表达效果；重组Equ c1蛋白的SDS-PAGE鉴定结果显示，目的条带在22KDa的位置，纯化洗脱中峰和洗脱后峰得到了比较纯的目的蛋白。通过对三个高抗原表位进行单位点突变和组合突变，共表达一种重组Equ c1蛋白和7种突变的Equ c1蛋白。结论：改造之后，第50、120、153三个抗原性最高的九肽与MHCⅡ类分子结合力都降低到了0.42以下，达到了我们预期的效果。三级结构模拟结果显示，位点突变前后，蛋白的三级结构均没有发生明显变化。利用StrepII tag的Western-Blot结果表明纯化后的重组蛋白与突变蛋白均为目的蛋白。
[Abstract]:Objective: the secretory protein Equ C1 is a major allergen, which can induce type I allergic reaction regulated by IgE in most patients with horse allergy. The aim of this study was to explore the recombinant low allergen Equ C1. To lay a foundation for its application in specific immunotherapy. Methods: in this study, we expressed Equ C1 of mature peptide region after codon optimization in Escherichia coli, and optimized the expression conditions, affinity purification and Western-Blot identification. The T cell epitopes of Equ C1 were predicted by MHC 鈪

本文编号：2191859