CCR9亲和短肽的筛选及其结合活性的鉴定

发布时间：2018-08-21 09:54

【摘要】：目的获取与CC趋化因子受体9(CCR9)具有亲和力的特定短肽。方法以CCR9的第2个胞外环为靶蛋白,反复筛选Ph.D.-12噬菌体展示肽库获得阳性克隆,通过ELISA测定噬菌体阳性克隆短肽与CCR9的亲和力,共聚焦显微镜检测短肽与CCR9高表达细胞MOLT4结合能力。结果经过3轮淘选、富集,确定了8个噬菌体克隆有插入序列,其中克隆C-4与靶蛋白具有较高亲和力,表达的短肽P1(VHWDFRQWWQPS)可抑制相应C-4克隆与靶蛋白的结合,并可与CCR9高表达的MOLT4细胞结合。结论通过噬菌体肽库筛选出了能与细胞表面分子CCR9结合的短肽序列VHWDFRQWWQPS。
[Abstract]:Objective to obtain a specific short peptide with affinity to CC chemokine receptor 9 (CCR9). Methods using the second extracellular loop of CCR9 as the target protein, the Ph.D.-12 phage display peptide library was screened repeatedly to obtain the positive clone. The affinity between the short peptide and CCR9 was determined by ELISA. Confocal microscopy was used to detect the binding ability of short peptide to MOLT4 of CCR9 overexpression cells. Results after three rounds of panning and enrichment, 8 phage clones were confirmed to have inserted sequences, among which the clone C-4 had high affinity with the target protein, and the expressed short peptide P1 (VHWDFRQWWQPS) could inhibit the binding of the corresponding C-4 clone to the target protein. It can bind to MOLT4 cells with high expression of CCR9. Conclusion the short peptide sequence VHWDFRQWWQPSs, which can bind to cell surface molecule CCR9, was screened by phage peptide library.
【作者单位】： 厦门大学附属第一医院检验科;厦门大学附属第一医院骨科;集美大学食品和生物工程学院;
【基金】：福建省自然科学基金青年创新项目(2013D012) 厦门大学附属第一医院青年科研发展基金(XYY201004)
【分类号】：R392-33

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本文编号：2195344