ICOS在健康人外周血调节性T细胞上的生物学特征初探

发布时间：2018-08-21 11:00

【摘要】：目的:研究ICOS在健康人外周血Treg离体培养中的作用,了解m TOR对离体培养Treg ICOS表达的调控。方法:MACS分选Treg后经anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激后第3、7天流式检测Treg表面ICOS表达情况;anti-CD3+anti-CD28抗体或anti-CD3+ICOSL-Fc刺激3 d,流式检测Treg ICOS表达情况;雷帕霉素处理离体培养Treg,流式分析其对Treg ICOS表达作用。CFSE标记人PBMC细胞,并与离体培养Treg混合培养,流式检测Treg的接触抑制活性。结果:anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激Treg 3 d,ICOS+Treg中活、死细胞的比例分别为(92.00±2.69)%和(2.20±0.56)%,在ICOS-Treg中比例为(90.30±3.53)%和(1.77±0.78)%,两者无显著差异;培养第7天,ICOS+Treg细胞比例从第3天(40.20±1.83)%降至(11.60±1.10)%;anti-CD3+ICOSL-FC刺激Treg 3 d后,ICOS MFI为(403.30±74.42),anti-CD3+anti-CD28刺激组为(2 410.0±746.4),anti-CD3+ICOSL-FC刺激后Treg ICOS表达相比anti-CD3+anti-CD28组显著下降;雷帕霉素处理离体培养Treg细胞3 d后,ICOS表达下调。此外,雷帕霉素处理的离体培养Treg均能有效抑制PBMC中Tcon的分裂增殖。结论:ICOS表达高低对人外周血Treg存活率影响无显著差异,m TOR信号并非调控人Treg离体培养ICOS表达的唯一因素,CD28协同信号对调控离体培养人Treg。表达比ICOSL信号更为重要,雷帕霉素处理的离体培养人Treg仍具有细胞接触抑制活性。
[Abstract]:AIM: To study the role of ICOS in the culture of healthy human peripheral blood Treg in vitro, and to understand the regulation of M TOR on the expression of Treg ICOS in vitro. Methods: The expression of ICOS on Treg surface was detected by flow cytometry on the 3rd and 7th day after Treg was sorted by MACS and stimulated by anti-CD3 + anti-CD28 magnetic beads. Results: Anti-CD3 + anti-CD28 magnetic beads stimulated Treg 3 d, ICOS + Treg in vivo, and the proportion of dead cells were (92.00 +2.69)% and (2.20)% respectively. The percentage of ICOS+Treg cells in ICOS-Treg was (90.30+3.53)% and (1.77+0.78)%. On the 7th day of culture, the percentage of ICOS+Treg cells decreased from (40.20+1.83)% to (11.60+1.10)%. After stimulating Treg with anti-CD3+ICOSL-FC for 3 days, the percentage of ICOS-MFI was (403.30+74.42), that of anti-CD3+anti-CD28 stimulation group was (742.0+CD410.4), and that of anti-CD3+FCL stimulation group was (742.0+CD4), respectively. Compared with anti-CD3+anti-CD28 group, the expression of Treg ICOS was significantly decreased after treatment with rapamycin for 3 days, and the expression of ICOS was down-regulated after treatment with rapamycin for 3 days. CD28 synergistic signal is more important than ICOSL signal in regulating the expression of human Treg in vitro, and rapamycin-treated human Treg still has the activity of cell contact inhibition.
【作者单位】： 浙江省立同德医院;
【基金】：浙江省医药卫生科技计划(2014KYA237)资助
【分类号】：R392

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本文编号：2195505