BMP-2诱导低氧环境下BMSCs向软骨表型分化

发布时间：2018-09-11 14:37

【摘要】：目的：探讨BMP-2联合低氧环境诱导BMSCs向成软骨生成分化的可行性，并进一步研究其生物学机制。 方法：体外培养4周龄健康清洁级雌性SD大鼠BMSCs，取第2代细胞根据培养条件不同将实验分为4组：常氧对照组（A组）、常氧加BMP-2诱导液组（B组）、低氧对照组（C组）和低氧加BMP-2诱导液组（D组）。倒置显微镜下观察细胞形态变化，阿利新蓝染色检测各组软骨基质糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAG）分泌水平，Western blot检测细胞内Ⅱ型胶原和低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）蛋白表达水平，RT-PCR检测成软骨、成骨以及低氧相关基因表达水平。 结果：D组诱导21天，细胞变为类圆形，细胞密度明显减少，细胞周边呈陷窝样，基质包裹细胞，而A、B和C组均未见上述典型变化。D组阿利新蓝染色较其他组明显深染，并随诱导时间延长，蓝染加深，21天时出现成片深染蓝色，其他实验组各时间点仅见散在少量的淡染蓝色。Western Blot检测细胞内Ⅱ型胶原蛋白表达水平D组较其他实验组显著增高（P0.05），HIF-1α蛋白表达水平C、D组较A、B组显著增高，差异有统计学意义（P0.05）。RT-PCR检测D组成软骨分化相关指标COL2α1、Agg表达最高，而B组成骨分化相关指标COL1α1、ALP、RUNX2表达水平最高，C和D组低氧相关的指标HIF-1α较A和B组显著增强（P0.05）。 结论：BMP-2联合低氧环境可以很好地诱导BMSCs向软骨表型分化，并抑制其成骨表型分化，，HIF-1α是参与其促软骨生成过程可能机制的一个重要信号分子。
[Abstract]:Aim: to investigate the feasibility and biological mechanism of BMP-2 combined with hypoxia in inducing BMSCs into chondrogenic differentiation. Methods: the second passage of BMSCs, cells of healthy clean grade female SD rats cultured in vitro were divided into four groups: normoxic control group (group A), normoxic plus BMP-2 induction solution group (group B) and hypoxic control group (group C). And hypoxia plus BMP-2 induction solution group (group D). The changes of cell morphology were observed under inverted microscope. The levels of glycosaminoglycan (glycosaminoglycans,GAG) secretion in chondrocytes were detected by alisin blue staining and the expression levels of collagen 鈪

本文编号：2236976