抗博尔纳病病毒磷蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2018-09-11 17:07

【摘要】：目的以重组的博尔纳病病毒(BDV)磷蛋白(p24)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性。方法以纯化后的重组BDVp24免疫小鼠,将骨髓瘤细胞与其脾细胞进行融合,经ELISA法筛选出分泌抗p24单抗的细胞株,并对其进行克隆与亚克隆培养,将最终获得的其中2株细胞株分别注入小鼠腹腔制备单抗,经亲和纯化法纯化后,采用ELISA法测定效价,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光鉴定其特异性。结果建立了2株稳定分泌抗p24单抗的杂交瘤细胞株,抗体亚类均为IgG1型。纯化后的腹水抗p24单抗纯度为98%和93%,ELISA效价在1∶81 000以上,该抗体均能识别重组p24蛋白和BDV感染人类少突胶质细胞(Oligodendroglia cell,OL细胞)所表达的p24蛋白。结论成功制备了灵敏性高、特异性好的抗BDVp24单抗,为博尔纳病病毒诊断方法的研制及感染机理的研讨提供依据。
[Abstract]:Objective to prepare monoclonal antibody against recombinant (BDV) phosphorous protein (p24) of Borna disease virus and identify its specificity. Methods mice were immunized with purified recombinant BDVp24, and myeloma cells were fused with spleen cells. The cell lines secreting anti-p24 monoclonal antibody were screened by ELISA method, and were cloned and subcloned. The final two cell lines were injected into mouse abdominal cavity to prepare monoclonal antibody. After purification by affinity purification, the titers were determined by ELISA method. The specificity of McAb was identified by Western blot and immunofluorescence. Results two hybridoma cell lines secreting anti-p24 McAb stably were established. The antibody subclasses were all of IgG1 type. The purity of purified ascites anti p24 monoclonal antibody was 98% and the titer of Elisa was more than 1:81. The antibody could recognize the p24 protein expressed by recombinant p24 protein and human oligodendrocyte (Oligodendroglia cell,OL) cells infected with BDV. Conclusion A highly sensitive and specific monoclonal antibody against BDVp24 was successfully prepared, which provides a basis for the development of the diagnostic method of Borna disease virus and the study of infection mechanism.
【作者单位】： 重庆三峡医药高等专科学校基础医学部;重庆医科大学神经科学研究中心;重庆三峡中心医院神经内科;
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973计划,No.2009CB918300)~~
【分类号】：R392-33

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本文编号：2237316