结核杆菌蛋白编码基因在不同菌株中的表达水平及意义

发布时间：2018-10-05 18:18

【摘要】：目的运用实时定量PCR(quantitative real-time, qRT-PCR)检测结核分枝杆菌蛋白Ag85B、38kDa及MPT64编码基因(fbpB, pstsl, mpt64)的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的上述蛋白抗原在转录水平的差异性及其意义。 方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB, pstsl, mpt64及内参基因Siga的特异性引物,将fbpB, pstsl, mpt64及Siga扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及梯度稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB, pstsl, mpt64基因表达水平的实时定量PCR方法。选用46株结核分枝杆菌临床分离株,包括药物敏感菌株24株,耐药菌株22株,北京基因型菌株26株和非北京基因型菌株20株,以及2株非结核分枝杆菌。应用qRT-PCR检测上述菌株、H37Rv标准株中fbpB, pstsl, mpt64基因的表达水平。 结果耐药菌株中的mpt64基因表达水平低于敏感菌株及H37Rv标准株,有统计学意义(t=3.093,p0.01；t=2.545,p0.05),fbpB, pstsl基因表达水平与敏感组及H37Rv标准株无差异；北京基因型菌株中的pstsl基因表达水平低于非北京基因型菌株及H37Rv标准株,结果有统计学意义(t=2.567,p0.05；t=2.373,p0.05),fbpB, mpt64基因表达与非北京基因型组及H37Rv标准株表达无差异。结核分枝杆菌活菌的扩增结果呈典型的S型曲线,而结核分枝杆菌死菌和2株非结核分枝杆菌呈水平直线,没有检测到荧光信号。 结论结核分枝杆菌菌株中的fbpB基因的表达量在敏感菌株和耐药菌株及北京基因型菌株和非北京基因型菌株均没有差异；结核分枝杆菌耐药菌株中的mpt64基因的表达量低于敏感株及H37Rv,在北京基因型菌株和非北京基因型菌株中的表达量没有差异；结核分枝杆菌北京基因型中pstsl基因的表达量低于非北京基因型及H37Rv,在敏感菌株和耐药菌株中的表达量没有差异。
[Abstract]:Objective to detect the expression of mycobacterium tuberculosis protein Ag85B,38kDa and MPT64 coding gene (fbpB, pstsl, mpt64 by real-time quantitative PCR (quantitative real-time, qRT-PCR, and to explore the drug-resistant and sensitive strains of Mycobacterium tuberculosis. The difference and significance of the above-mentioned protein antigens between the Beijing genotype and non-Beijing genotype at the transcriptional level. Methods according to the sequence provided by GenBank, the specific primers for fbpB, pstsl, mpt64 and Siga were designed. The amplified fragments of fbpB, pstsl, mpt64 and Siga were cloned into the recombinant plasmid pMD18-T simple,. SYBR Green 鈪，

本文编号：2254388