超顺磁性氧化铁和DAPI双标记大鼠骨髓间充质干细胞

发布时间：2018-10-08 09:40

【摘要】：目的：骨髓间充质干细胞目前已经成为重要的组织工程种子细胞,而若想深入研究MSCs在体内外增殖、分化的规律首先需要解决如何能高效、安全地标记MSCs问题。本文通过观察SPIO及DAPI对大鼠骨髓间充质干细胞的双标记效果及其对细胞存活、增殖以及凋亡的影响,为间充质干细胞的活体示踪研究奠定基础。 方法：分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,用SPIO及DAPI双标记后分别用普鲁士蓝染色法和激光共聚焦显微镜观察其铁标记率及荧光标记率。用台盼蓝检测细胞活力；MTT法检测标记干细胞增值力；Calcein-AM/PI以及AO/PI双染细胞,检测细胞存活率以及凋亡率。 结果：SPIO及DAPI在体外双标记大鼠骨髓间充质干细胞效率高,几乎达100%;台盼蓝染色显示标记细胞的存活率为97%；MTT法检测发现双标记干细胞组的活力以及增殖力与未标记干细胞组相比差异均无显著性意义(P0.05)；Calcein-AM/PI染色,未标记细胞及双标记细胞的存活率分别为96%和95%；AO/PI染色,未标记及双标记细胞的凋亡率均为1%。 结论：超顺磁性氧化铁和DAPI双标记大鼠骨髓间充质干细胞后,对于干细胞的存活、增殖以及凋亡无影响。
[Abstract]:Objective: bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) have become important seed cells for tissue engineering. In order to study the proliferation of MSCs in vivo and in vitro, it is necessary to solve the problem of how to label MSCs efficiently and safely. The effects of SPIO and DAPI on the double labeling of rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and their effects on cell survival, proliferation and apoptosis were observed in order to lay a foundation for the in vivo tracer study of mesenchymal stem cells (MSCs). Methods: rat bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and cultured. After double labeling with SPIO and DAPI, the iron-labeling rate and fluorescence labeling rate were observed by Prussian blue staining and laser confocal microscopy, respectively. Trypan blue assay was used to detect the viability of the cells. The cell viability and apoptosis rate were detected by MTT assay. The cells were labeled with Calcein-AMP / Pi and AO/PI double staining. Results the double labeled rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were highly efficient in vitro, almost 100% by trypan blue staining, and 97% by trypan blue staining. MTT assay showed that there was no significant difference in activity and proliferative power between double labeled stem cell group and unlabeled stem cell group (P0.05). The survival rates of unlabeled cells and double labeled stem cells were 96% and 95% respectively. The apoptotic rate of unlabeled and double labeled cells was 1%. Conclusion: superparamagnetic ferric oxide and DAPI double labeled rat bone marrow mesenchymal stem cells have no effect on the survival, proliferation and apoptosis of stem cells.
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

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本文编号：2256302