小鼠对副粘病毒Tianjin株易感性的研究

发布时间：2018-10-18 17:07

【摘要】：人副流感病毒Ⅰ型(HPIV-1)为一种有包膜的单股负链RNA病毒,是引起婴幼儿呼吸道疾病的重要病原体之一。每年婴幼儿因此病毒引发的呼吸道疾病住院率达6%,临床表现可为鼻炎、咽炎、中耳炎、喉炎、细支气管炎、肺炎等,目前临床尚无特效的治疗药物及预防用疫苗,且缺乏适宜的小动物模型用于研究。以啮齿类动物为主要感染对象的仙台病毒(Sendai virus, SeV)与]3PIV-1在基因组序列和血清学方面高度相关,两者存在保护性交叉免疫反应,还有相似的传播途径及组织亲嗜性,因此,SeV被认为是研究HPIV-1致病性的最佳模型及疫苗的最佳候选者。副粘病毒Tianjin株是1999年从某动物中心群体突发的严重下呼吸道感染致死的普通棉耳狨猴肺组织中分离到的一株高血凝效价病毒,经全基因组测序(GenBank accession number EF679198)和种系进化分析,证明存在独特的440个核苷酸和110个氨基酸残基的变异,是SeV新的基因型。SeV本是啮齿类动物的嗜肺病毒,却表现出跨种传播和对普通棉耳狨猴的高致病性。在普通棉耳狨猴群体感染流行期间,饲养在同一动物中心的小鼠无一例发病,当时实验中心饲养的小鼠种类主要为Kunming和BALB/c。为了探明Tianjin株是否对其他种类的小鼠也具有低致病性,同时寻找对Tianjin株病毒感染敏感的小型啮齿类动物做为模型,我们选取了不同品系的小鼠对副粘病毒Tianjin株易感性做进一步研究。首先,将129Sv、DBA/2、Kunming、BALB/c四种小鼠分别接种5μl1.5×107PFU和30μ11.5×107PFU Tianjin株病毒液,以接种5μl和30μl磷酸盐缓冲液(PBS)作为对照,连续观察12天小鼠的体重变化,计算生存率。结果显示129Sv、DBA/2、Kunming、BALB/c小鼠在接种副粘病毒Tianjin株5μl后,最高平均体重变化分别为-13.0%、-4.7%、6.6%、6.3%,12天生存率均为100%;接种30μl病毒液,最高平均体重下降-21.7%、-30.3%、-16.7%、-9.6%;12天生存率分别为20%、0%、80%、100%。根据体重变化和生存率,四种鼠从易感到耐受的顺序为DBA/2129SvKunmingBALB/c。为了进一步探讨四种鼠对副粘病毒Tianjin株易感性的不同,我们用30μl3×105PFU病毒分别滴鼻接种129Sv、DBA/2、Kunming和BALB/c四种小鼠,于感染后的第1、3、5、7、9和11天分别牺牲小鼠,取右肺、气管和鼻咽组织,空斑试验检测各组织中的病毒滴度,动态观察小鼠体内病毒复制情况。同时,将左肺组织置于4%福尔马林溶液固定,石蜡包埋制成切片,经HE染色,镜下观察病理变化。结果显示,(1)虽然病毒在4种鼠的肺、鼻咽和气管组织中复制程度不同,但均为肺组织病毒滴度最高,鼻咽次之,气管最低,绘制出的病毒滴度曲线趋势各种鼠相似,均表现为增高后降低；(2)四种鼠三种组织病毒滴度峰值出现的时间不同。DBA/2鼠的肺、鼻咽和气管病毒滴度峰值均在第5天；129Sv鼠的肺和鼻咽在第5天最高,而气管表现延迟出现在第7天。Kunming鼠肺的病毒滴度峰值出现在第7天,鼻咽在第3天,气管在第5天。BALB/c鼠肺和鼻咽在第5天,气管在第3天。(3)肺组织病理改变,DBA/2鼠在整个实验过程中最明显,从接种后第1天至第7天肺病变逐渐加重,是四种鼠中最早出现病变为+++的鼠种,镜下可见成片的淋巴细胞聚集在肺间质内,有大量的中性粒细胞,能明显识别巨噬细胞,肺泡囊内可见大量渗出物,粘膜下层增生明显,气道上皮损伤严重,整个视野内可见坏死的细胞,基本无完整的肺泡结构。129Sv鼠肺病变次之,虽然病变也出现了+++,但时间较DBA/2迟,出现在第9天,病理过程较DBA/2缓慢。Kunming、BALB/c病变相对较轻,二者最高病理分级均为++,Kunming出现++的时间较BALB/c早,持续时间长。在四种鼠中,BALB/c鼠的肺病变最轻、出现时间晚、持续时间短。结论：综合体重变化、生存率、病毒增殖情况和病理改变4项指标,四种鼠从易感到耐受的顺序可为DBA/2129SvKunmingBALB/c。综上所述,无论是体重变化、生存率,呼吸道三种组织病毒复制,及肺组织病理改变,都显示四种鼠对副粘病毒Tianjin株的感染易感性存在差异,从易感到耐受的顺序为DBA/2129SvKunmingBALB/c。DBA/2和129Sv小鼠适宜做为副粘病毒Tianjin株致病性、疫苗等研究的首选敏感实验动物。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R373.1

【参考文献】