牛磺酸抑制主动脉瓣膜间质细胞向成骨细胞分化的研究

发布时间：2018-11-02 15:30

【摘要】：目的：分离并培养出人主动脉瓣膜间质细胞,证实其表达牛磺酸转运体并未被其他种类细胞所污染,进而为实验提供干预对象。方法：收集A型主动脉夹层患者的主动脉瓣叶(病检排除微小的病变),用酶解法降解细胞外基质,分离出瓣膜间质细胞。免疫组化鉴定细胞的表型：牛磺酸转运体,平滑肌α肌动蛋白,波形蛋白,CD31,平滑肌肌球蛋白和结蛋白。结果：分离出的主动脉瓣膜间质细胞能够增殖,并表达牛磺酸转运体,平滑肌α肌动蛋白和波形蛋白,但不表达CD31,平滑肌肌球蛋白和结蛋白。结论：酶解法分离的人主动脉瓣膜间质细胞能够在体外条件下增殖,并表达特有的表型,且未被内皮细胞和肌细胞所污染。目的：通过药物干预建立主动脉瓣膜间质细胞向成骨细胞分化的细胞模型。方法：对细胞使用钙化培养基(含p甘油磷酸钠,地塞米松和维生素C)促进主动脉瓣膜间质细胞向成骨细胞分化。通过碱性磷酸酶活性检测、染色和钙化结节染色(von Kossa法)以及western blot检测碱性磷酸酶及Cbfα1的表达评估该模型的效果。结果：在药物干预后的第21天,模型组较对照组的碱性磷酸酶活性、染色和钙化结节染色更明显,且表达更多的ALP和Cbfα1。结论：钙化培养基能够明显地促进主动脉瓣膜间质细胞向成骨细胞分化,表达碱性磷酸酶和Cbfα1并形成钙化结节。目的：证实牛磺酸能够抑制主动脉瓣膜间质细胞向成骨细胞分化,并讨论牛磺酸转运体和ERK通路在其中扮演的角色。方法：在钙化培养基中分别添加不同浓度的牛磺酸(1mM,3mM,5mM,10mM,20mM),或牛磺酸(10mM)+ERK通路阻滞剂PD98059干预24小时后检测核结合因子α-1的表达水平,在干预的第14天和第21天分别检测碱性磷酸酶的活性和表达水平。干预的第21天检测钙化结节和钙含量,并检测表型蛋白的变化。在培养基中添加牛磺酸(10mM)后,在不同时间(5min,10min,30min,60min,120min)检测ERK通路的激活情况。在培养基中同时添加牛磺酸(10mM)和牛磺酸转运体阻滞剂p丙氨酸/PD98059,干预20分钟后检测ERK通路的激活程度。结果：牛磺酸以浓度依赖性抑制细胞产生核结合因子α-1和碱性磷酸酶(10mM浓度时作用最明显),PD98059能够明显抑制牛磺酸的上述作用。牛磺酸(10mM)可明显减少钙化结节的产生。牛磺酸能够激活ERK通路,且p丙氨酸和PD98059能够抑制牛磺酸对该通路的激活。结论：牛磺酸通过牛磺酸转运体和ERK通路以浓度依赖性抑制主动脉瓣膜间质细胞向成骨细胞分化。
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【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R329

【参考文献】