重组人源抑制型受体TIGIT在大肠埃希菌中的制备及其作用特性研究

发布时间：2018-11-10 13:30

【摘要】：目的·在大肠埃希菌中制备人源GST-TIGIT融合蛋白并探究其与具核梭杆菌(Fn)互相作用特性。方法·对人源免疫调节蛋白TIGIT的基因进行扩增,重组到p GEX4T2表达载体中并转入大肠埃希菌BL21(DE3)中表达融合蛋白;利用GST亲和层析方法纯化GST-TIGIT融合蛋白;采用特异性黏附试验检测GST-TIGIT融合蛋白与Fn的相互作用。结果·GST-TIGIT融合蛋白在大肠埃希菌中成功表达并利用GST亲和层析柱得到纯化蛋白;GST-TIGIT融合蛋白可特异性地结合于Fn表面,但与嗜酸乳杆菌结合较弱。结论·通过原核表达系统得到有活性的人源GST-TIGIT融合蛋白,并初步证明了其与Fn的黏附作用,为后续研究TIGIT蛋白与Fn特异性相互作用的机制奠定了基础。
[Abstract]:Objective to prepare human GST-TIGIT fusion protein from Escherichia coli and study its interaction with (Fn). Methods the gene of human immunoregulatory protein (TIGIT) was amplified and recombined into p GEX4T2 expression vector and transferred into Escherichia coli BL21 (DE3) to express the fusion protein. GST-TIGIT fusion protein was purified by GST affinity chromatography. The interaction between GST-TIGIT fusion protein and Fn was detected by specific adhesion test. Results the GST-TIGIT fusion protein was successfully expressed in Escherichia coli and purified by GST affinity chromatography. The GST-TIGIT fusion protein could bind to the surface of Fn but not to Lactobacillus acidophilus. Conclusion the active human GST-TIGIT fusion protein was obtained by prokaryotic expression system, and its adhesion to Fn was preliminarily proved, which laid a foundation for further study on the mechanism of specific interaction between TIGIT protein and Fn.
【作者单位】： 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔预防科上海市口腔医学重点实验室;上海交通大学医学院细胞分化与凋亡教育部重点实验室;
【基金】：上海交通大学医学院附属第九人民医院院级基金(院2012-04)~~
【分类号】：R378

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本文编号：2322605