Nrf2重组慢病毒对C2C12细胞增殖、凋亡和分化的影响

发布时间：2018-11-11 12:30

【摘要】：目的:研究Nrf2对C2C12细胞向成骨细胞分化过程增殖、凋亡和分化的影响。方法:分别构建和包装Nrf2(nuclear factor erythroid 2 p45 related factor 2)过表达及靶向Nrf2和活性转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)的siRNA重组慢病毒颗粒;在骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)诱导下,设立不同病毒感染组处理C2C12细胞,检测各处理组C2C12细胞的增殖、凋亡及成骨相关标志基因的表达。结果:FCM结果显示,BMP2+Lv-Nrf2组细胞凋亡率低于BMP2+Lv-GFP组(P0.05),BMP2+Lv-si Nrf2组细胞凋亡率高于BMP2+Lv-GFP组(P0.05),BMP2+Lv-Nrf2+Lv-siATF4组细胞凋亡率低于BMP2+Lv-GFP组(P0.05)并同时低于BMP2+Lv-siATF4组(P0.05);蛋白免疫印迹检测结果与FCM凋亡结果一致;免疫细胞化学检测结果显示,实验组BMP2+Lv-Nrf2组中骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)与碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达增高,而BMP2+Lv-si Nrf2组中两种蛋白表达均降低(P0.05),联合处理组BMP2+Lv-Nrf2+Lv-siATF4中两种蛋白表达低于对照组和BMP2+Lv-Nrf2组(P0.05)。结论:上述结果表明,在BMP2诱导C2C12细胞成骨分化过程中,Nrf2可抑制C2C12细胞的凋亡,促进其向成骨分化,同时,可挽回因ATF4蛋白减少而产生的细胞凋亡,但对C2C12细胞的骨向分化没有影响。
[Abstract]:Aim: to study the effects of Nrf2 on the proliferation, apoptosis and differentiation of C2C12 cells. Methods: the recombinant lentivirus particles of Nrf2 (nuclear factor erythroid 2 p45 related factor 2 were constructed and packaged respectively, and the recombinant siRNA lentivirus particles targeting Nrf2 and active transcription factor 4 (activating transcription factor 4 ATF4 were constructed and packaged respectively. Under the induction of bone morphogenetic protein 2 (BMP2), different viral infection groups were established to treat C2C12 cells. The proliferation, apoptosis and expression of osteoblast related marker genes of C2C12 cells in each treatment group were detected. Results: FCM results showed that the apoptosis rate of BMP2 Lv-Nrf2 group was lower than that of BMP2 Lv-GFP group (P0.05), and that of BMP2 Lv-si Nrf2 group was higher than that of BMP2 Lv-GFP group (P0.05). The apoptosis rate of BMP2 Lv-Nrf2 Lv-siATF4 group was lower than that of BMP2 Lv-GFP group (P0.05) and at the same time lower than that of BMP2 Lv-siATF4 group (P0.05). The results of Western blotting were consistent with those of FCM apoptosis. The expression of osteocalcin (osteocalcin,OCN) and alkaline phosphatase (alkaline phosphatase,ALP) in BMP2 Lv-Nrf2 group was higher than that in BMP2 Lv-si Nrf2 group (P0.05). The expression of two proteins in BMP2 Lv-Nrf2 Lv-siATF4 of combined treatment group was lower than that of control group and BMP2 Lv-Nrf2 group (P0.05). Conclusion: in the process of osteogenic differentiation of C2C12 cells induced by BMP2, Nrf2 can inhibit the apoptosis of C2C12 cells and promote its osteogenic differentiation, at the same time, it can reverse the apoptosis caused by the decrease of ATF4 protein. However, there was no effect on bone differentiation of C2C12 cells.
【作者单位】： 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室发育生物学与模式动物平台;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:No.81371928;No.81171697) 教育部新世纪优秀人才支持计划资助项目(编号:NCET-12-1090)
【分类号】：R3416

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