脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰Hes1的表达对关键基因的影响

发布时间：2018-11-19 10:29

【摘要】：目的:本部分的研究通过检测胚胎大鼠脊髓源神经干细胞在RNA干扰Hes1基因后定向诱导分化为胆碱能神经元过程中对Mash1基因的影响,探讨神经干细胞定向分化为胆碱能神经元的分化机制。 方法:将孕龄17d的胚胎大鼠脊髓组织制备成单细胞悬液,接种到限定性无血清培养液中培养,待原代克隆球形成后单纯诱导组加入诱导因子RA、SHH、NT-3和BDNF对神经干细胞进行诱导分化;干扰组加入干扰因子siRNA6小时之后,再加入同上的诱导因子对神经干细胞进行诱导分化。应用实时定量PCR技术分析神经干细胞在向胆碱能神经元诱导分化1w、2w和干扰Hes1基因后诱导分化1w、2w时Mash1基因的表达变化。 结果:Hes1、Mash1和ChATmRNA在神经干细胞整个培养过程中均有表达,Hes1和Mash1在诱导1w时各基因均较对照组表达下降,诱导2w时表达较诱导1w时增高,但低于对照组;ChAT在整个诱导过程中呈增高趋势。在进行RNAi后,Hes1基因表达降低,Mash1基因表达诱导1w时较对照组低,诱导2w时又较诱导1w时高,且高于对照组和单纯诱导组。在干扰Hes1基因并诱导分化后ChAT基因表达量均较对照组表达高,且较单纯诱导组也高。 结论:Hes1和Mash1参与了神经干细胞向胆碱能神经元的分化过程,并且发挥了重要的作用,Hes1对神经干细胞分化过程中有调控作用,与Mash1呈负调控作用。Hes1表达的减弱和Mash1表达的增加可能是神经干细胞由增殖转向神经元分化的重要因素。 目的:在胚胎大鼠脊髓源性神经干细胞定向诱导分化为胆碱能神经元过程中通过人为干扰Hes1基因的表达,检测Aldoc、Stmn1、Ywhag和Sept-9基因的表达,探讨神经干细胞在诱导分化过程中Aldoc、Stmn1、Ywhag和Sept-9可能发挥的作用及与Hes1基因的作用关系。 方法:取体外培养的神经干细胞,接种于多聚赖氨酸包被过的6孔培养板中,同时加入Hes1干扰因子siRNA,然后在培养基中添加诱导因子RA、SHH、NT-3和BDNF,诱导神经干细胞向胆碱能神经元分化。应用实时定量PCR技术分析神经干细胞向胆碱能神经元诱导分化1w和2w时以及siRNA干扰Hes1基因并诱导分化1w和2w时Aldoc、Stmn1、Ywhag和Sept-9基因的表达变化。 结果:在神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元的过程中,Aldoc基因表达量诱导后较对照组低;Stmn1和Ywhag基因表达量在诱导1w时较对照组低,诱导2w时较诱导1w时高,且高于对照组;Sept-9基因表达量在诱导分化后较对照组呈降低趋势,但诱导2w时又较诱导1w时高。在对Hes1基因干扰并将神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中,Aldoc基因表达量与对照组相比呈降低趋势,但诱导2w时其表达量高于诱导1w时,且均高于单纯诱导组表达量;Stmn1基因表达量在诱导1w和诱导2w时均较对照组高,且高于单纯诱导组表达量;Ywhag基因表达量在诱导1w时较对照组低,诱导2w时又比诱导1w时高,且低于单纯诱导组;Sept-9基因表达量在诱导1w和诱导2w时均较对照组低,且均低于单纯诱导组表达量。 结论:Aldoc、Stmn1、Ywhag、Sept-9参与了神经干细胞向胆碱能神经元的分化过程,Aldoc和Sept-9可能对神经干细胞的干性维持有一定作用;Stmn1和Ywhag可能在脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元的后期发挥作用;并且Aldoc和Sept-9与Hes1呈正相关,Stmn1和Ywhag与Hes1呈负相关。
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【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R329

【参考文献】

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本文编号：2342029