TBK-1增强HBcAg核酸疫苗特异性免疫应答的实验研究

发布时间：2018-12-08 13:52

【摘要】：乙型肝炎(hepatitis B)是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)引起的以肝实质细胞变性、坏死为主要病变的高危害性传染性疾病。慢性HBV感染常常会导致肝硬化、肝衰竭以及肝细胞癌的发生,严重威胁着人类的健康。乙型肝炎慢性化的一个主要原因是感染者缺乏有效的特异性免疫应答,不能清除其体内的乙肝病毒。在乙型肝炎的治疗领域,目前采用的药物治疗多数疗效并不理想,亟待研究新的治疗策略。 DNA疫苗,又称核酸疫苗或基因疫苗,是随着基因治疗技术的发展而产生的一种新型疫苗,不仅具有预防疾病的作用,同时还具有治疗疾病的应用价值。诸多实验已经证实HBV DNA疫苗能够诱导机体产生抗原特异性细胞免疫及体液免疫应答,接种后可以诱导多种实验动物产生特异性CTL反应及产生特异性抗体。但是,DNA疫苗在人体的免疫效果始终不能尽如人意。如何提高HBV DNA疫苗的免疫效果是DNA疫苗研究领域的热点之一,目前采用的研究策略主要是通过联合免疫佐剂的方法来增强DNA疫苗的免疫效果,将某些具有增强免疫应答的分子基因、蛋白质以及其它免疫活性分子联合DNA疫苗注入机体以增强免疫效果,这些分子主要包括共刺激分子、趋化因子、诱导凋亡的分子、Toll样受体及其配体等。 乙肝核心抗原(HBcAg)能够在原核生物中稳定表达,且保留其固有的免疫原性,是典型的T细胞非依赖性抗原和T细胞依赖性抗原,可以在小鼠模型中诱发强烈的HBcAg特异性的Th细胞反应并产生抗体。近年来有关固有免疫应答的机制的研究取得了重大的进展,TBK-1(TANK binding kinase-1)是一种TRAF (TNFR associating factor)家族相关的结合激酶,活化的TBK-1能够诱导IRF3的磷酸化以及NF-κB激活,进而促进IFN-β的产生,是固有免疫应答过程中的重要信号分子。 本研究采用以哺乳动物高表达质粒(pcDNA3.1)为载体的HBcAg DNA疫苗,以BALB/c小鼠为实验动物,观察TBK-1对HBcAg DNA疫苗诱导小鼠特异性体液免疫和细胞免疫应答的影响。采用pcDNA3.1(+)作为载体,构建真核表达质粒pcTBK-1;在体外模拟dsDNA刺激L929细胞,检测TBK-1对其诱导产生IFN-β的影响；用HBcAg核酸疫苗(pcHBc)单独或联合质粒pcTBK-1免疫BALB/c小鼠,分别在第0,3,6周进行免疫,在第8周检测特异性抗体,脾脏淋巴细胞增殖,细胞因子IFN-γ及IL-4表达水平以及HBcAg特异性CTL活性等免疫学指标。结果显示,dsDNA刺激各组L929细胞后,TBK-1转染组与对照组相比在mRNA水平及蛋白水平均能显著增强IFN-β的表达(P0.05)。pcHBc联合pcTBK-1免疫小鼠的抗-HBc水平显著增高(P0.05)；淋巴细胞在体外经HBcAg刺激后,其增殖程度明显高于pcHBc单独免疫组(P0.05)；经HBcAg刺激后的淋巴细胞培养上清中,联合免疫组IFN-γ表达水平显著增高(P0.05),而IL-4表达水平无明显改变(P0.05)；单独pcHBc免疫及联合免疫的小鼠中,HBcAg特异性CTL杀伤率均高于对照组,其中联合免疫组小鼠的CTL杀伤率显著增高(P0.05),提示TBK-1能够增强HBcAg核酸疫苗诱导的特异性体液免疫及细胞免疫应答,并且主要通过Thl型免疫应答途径,初步阐释了TBK-1作为分子免疫佐剂的作用机制。 综上所述,在细胞模型中,TBK-1在dsDNA刺激作用下,能够显著增强下游IFN-β的表达；在小鼠模型中,TBK-1能够增强HBcAg核酸疫苗诱导的特异性体液免疫及细胞免疫应答,初步揭示了TBK-1作为HBV DNA疫苗佐剂的可行性。研究结果为HBV DNA疫苗的研究提供了实验和理论依据,并为慢性乙型肝炎的治疗提供了新的思路。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R392

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本文编号：2368470