长寿老人肠道益生菌（probiotics）的分离鉴定及长寿机理的研究

发布时间：2018-12-23 09:34

【摘要】：本研究通过微生物分离和分子鉴定方法针对来源于和田长寿老人和一般人肠道的细菌及乳酸菌总数进行测定。对其中的乳酸菌进行分离鉴定的同时，筛选出具有胆固醇能力及耐受胃肠道酸性、胆汁盐性能和奶蛋白酶性能的菌株并对产生有抑菌作用的发酵产物进行初步研究和探讨作用机理。微生物数量测定及分类实验结果表明，长寿老人肠道中细菌总数为7.2×10~6cfu/g，乳酸菌数量为4.9×10~4cfu/g，一般人肠道中细菌总数为8.0×10~6cfu/g，乳酸菌数量为7.3×10~3cfu/g。通过选择性培养基平板涂布法筛选得到长寿老人和一般人肠道乳酸菌27株，经细胞和菌落形态结构、革兰氏染色和生理生化特性，16S rDNA基因序列分析和系统发育分析结果表明，27株分别属于肠球菌属和乳杆菌属，其中18株属于耐久肠球菌，1株属于屎肠球菌，5株属于植物乳杆菌植物亚种，2株属于戊糖乳杆菌，1株属于类干酪乳杆菌。从抑菌实验结果得知，27株实验菌株都有一定的抑菌能力，但从长寿老人粪便中分离得到的所有菌株抑菌能力强于来自一般人肠道的所有菌株。耐久肠球菌R02-23，植物乳杆菌植物亚种R03-13，戊糖乳杆菌S04对三种指示菌抑制效果均较好，作为进一步研究益生菌（乳酸菌）抑菌机理。乳酸菌代谢产物---有机酸（乳酸，丁酸和乙酸）和细菌素类（对热稳定且对酸和蛋白酶敏感）做主要底物进行抑菌实验。实验结果，在低pH条件下两类物质有明显的抑菌作用。低pH是表现抑菌活性的必要条件，本研究中pH低于4.50时抑菌物质才能发挥作用。胆固醇广泛存在于动物体内，是细胞膜的组成成分，参与了一些甾体类激素和胆酸的生物合成，但是特内胆固醇含量高于正常值并导致动脉粥样硬化和冠心病的发生与发展。所以本实验检测实验菌株的体外降胆固醇能力。27株乳酸菌都有一定的降胆固醇的能力，脱除率在22.32%-78.57%之间，，平均脱除率50.63%，13株（都是长寿老人源菌株）脱除率高于平均值。长寿益生菌中最高脱除率为78.57%，最低为40.41%，对照组中最高脱除率是48.21%，最低是22.32%。筛选高降胆固醇能力的菌株10株，并检测10株菌对胆汁盐，对酸和蛋白酶的耐受性。实验结果表明，10株实验菌株中筛选出耐酸，耐胆汁盐，耐蛋白酶能力强的三株菌（耐久肠球菌R02-23，植物乳杆菌植物亚种R03-13，戊糖乳杆菌S04）。对耐久肠球菌R02-23，植物乳杆菌植物亚种R03-13，戊糖乳杆菌S04等三株菌进行降胆固醇机理研究，结果表明，三株菌具有降低发酵液胆固醇含量的作用，并具有一定程度的吸附和同化作用，通过菌体对一定程度超声波耐受能力的考察，证明菌体对胆固醇的同化作用和生物功能之间具有一定的相关性，并初步确认为益生菌降胆固醇的机制。以上所有实验结果表明，R02-23，R03-13，S04等长寿老人源乳酸菌的抑菌能力，降胆固醇能力和耐受胃肠道中恶劣环境的能力都强于一般人的乳酸菌（R07-28，R05-35）。因此长寿老人的长寿能力与耐久肠球菌R02-23，植物乳杆菌植物亚种R03-13，戊糖乳杆菌S04有很大的关系，这方面的具体内容需进行进一步研究。
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【学位授予单位】：新疆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R371

【参考文献】