pCD86-RAE-1ε转基因小鼠NK细胞活性分析

发布时间：2019-01-02 11:40

【摘要】：树突状细胞(dendritic cell, DC)与NK细胞之间的相互作用对体内天然免疫和获得性免疫功能均有重要影响。前期研究发现,DC细胞诱导表达MHCI类相关抗原A (MICA)后具有激活NK细胞的活性,而MICA在肿瘤细胞和正常上皮细胞的持续表达却下调NK细胞活性。因此,为观察DC细胞体内持续表达MICA对NK细胞功能的影响,课题组前期制备了以小鼠CD86基因启动子调控视黄酸早期转录蛋白-1(retinoic acid early transcript-1, RAE-1)的转基因小鼠(RAE-1是MICA在小鼠体内对应分子)。本研究则主要分析pCD86-RAE-1ε转基因小鼠体内NK细胞的活性,从而深入阐明DC持续表达NKG2D配体对NK细胞功能的影响。 一、体外分析pCD86-RAE-1ε转基因小鼠NK细胞的活性 目的：比较生理状态下及聚肌胞刺激后,pCD86-RAE-1ε转基因小鼠与对照小鼠脾脏单细胞悬液内NK细胞杀伤活性及相关表型的差异。 方法：首先,分离pCD86-RAE-1ε转基因小鼠与对照小鼠脾脏单细胞悬液,利用流式细胞术检测NK细胞频率,NK细胞杀伤YAC细胞活性,以及细胞表面NKG2D、CD69、 NKp46和2B4的表达。并用LDH释放法鉴定NK细胞对YAC细胞的杀伤活性。其次,对脾脏单细胞悬液用聚肌胞刺激过夜,基于流式细胞术检测NK细胞杀伤YAC细胞的性,以及NK细胞表面NKG2D、CD69、NKp46和2B4的表达,同时用LDH释放法检测NK细胞杀伤YAC细胞的活性。 结果：与对照小鼠相比,pCD86-RAE-1ε转基因小鼠脾脏内NK细胞的频率没有明显差异。生理状态下,转基因小鼠脾脏NK细胞的细胞毒活性与对照小鼠无差异。转基因鼠脾脏NK细胞NKG2D和2B4表达下调,CD69表达上调,但NKp46表达无明显变化。聚肌胞刺激后,转基因小鼠脾脏NK细胞的杀伤活性明显增高,NKG2D和CD69的表达显著上调,而NKp46和2B4的表达在转基因小鼠和对照小鼠脾脏NK细胞均下调。 结论：抗原递呈细胞持续表达RAE-1ε可下调体内NK细胞表面NKG2D的表达,但对NK细胞杀伤活性无明显影响。受聚肌胞刺激,pCD86-RAE-1ε转基因小鼠脾脏NK细胞活性显著提高。 二、体内分析pCD86-RAE-1ε转基因小鼠NK细胞的活性 目的：体内分析转基因小鼠NK细胞杀伤不同RAE-1表达水平靶细胞的活性。 方法：首先利用LDH释放法,观察经IL-2刺激的小鼠NK细胞杀伤转基因小鼠和对照小鼠脾脏单细胞悬液活性,以及该杀伤活性是否主要依赖于脾脏B细胞表面RAE-1表达。其次将聚肌胞分别腹腔注射转基因小鼠与对照小鼠,次日分离脾脏单细胞悬液,流式细胞术分析NK细胞杀伤活性、及NKG2D和CD69的表达。最后分别用CFSE和PKH26标记转基因鼠和对照小鼠脾脏细胞,等比例混合,尾静脉分别注射至正常状态、或经聚肌胞刺激的转基因鼠和对照小鼠,14小时后取脾脏制备单细胞悬液,流式细胞术检测两种不同标记细胞的比例变化以评估体内NK细胞杀伤率。 结果：生理状态下,pCD86-RAE-1ε转基因小鼠与对照小鼠体内NK细胞杀伤活性无明显差异。但聚肌胞刺激后,转基因小鼠NK细胞杀伤活性、CD69阳性NK细胞频率均高于对照小鼠组,而NKG2D阳性NK细胞频率仍低于对照小鼠。同时转基因小鼠体内NK细胞的杀伤活性明显高于对照小鼠。 结论：抗原递呈细胞持续表达RAE-1对NK细胞活性的影响与肿瘤细胞、正常上皮细胞持续表达RAE-1对NK细胞的影响不同,提示尽管NKG2D配体在不同细胞表面的持续表达均下调NK细胞表达NKG2D,对NK细胞的活性却具有不同的影响。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R392.12

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本文编号：2398436