N-糖基化移位对乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白核酸疫苗的表达及免疫原性的影响

发布时间：2019-01-18 17:52

【摘要】：目的:研究N-糖基化移位对乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白核酸疫苗体外蛋白表达及小鼠体内体液免疫及细胞免疫应答的影响。方法:通过基因工程中定点突变技术,将乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs)中第4位氨基酸上连接的糖链去除,或将糖链依次移位至第5、6或7位氨基酸,来构建N-糖基化去除及移位的核酸疫苗,分别命名为Adr-dN4、Adr-N4-5、Adr-N4-6、Adr-N4-7。用上述核酸疫苗与野生型MHBs核酸疫苗(pSW3891/MHBs/Adr,简称Adr)及空载体质粒pSW3891分别用脂质体瞬时转染293T细胞,应用蛋白印迹法检测MHBs的表达。采用肌肉注射法,以各组疫苗分别对BALB/c小鼠于第0、2、4和6周进行免疫,用ELISA法检测小鼠血清中抗-HBs抗体、ELISPOT法检测小鼠表面抗原多肽特异性分泌IFN-γ的脾细胞数量。结果:蛋白印迹法结果显示Adr、Adr-dN4、Adr-N4-5、Adr-N4-6、Adr-N4-7体外转染293T细胞后,均可以在293T细胞内表达,且Adr、Adr-N4-5、Adr-N4-7可将表达产物分泌到细胞外。ELISA及EISPOT结果表明:Adr免疫组小鼠抗-HBs终点滴度及表面抗原特异性分泌IFN-γ的脾细胞数量,均略高于其他免疫组小鼠,但与Adr-N4-5、Adr-N4-7相比无统计学差异(P0.05),与Adr-dN4和Adr-N4-6组相比有显著的统计学差异(P0.05)。结论:在第5或7位氨基酸附加N-连接糖链,能修补或替代Asn4连接糖链引导MHBs分泌的功能。HBs表达蛋白分泌到细胞外对诱导机体产生特异性细胞和体液免疫是至关重要的。
[Abstract]:Aim: to study the effects of N-glycosylation on protein expression in vitro, humoral immunity and cellular immune response in mice with hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) protein nucleic acid vaccine. Methods: by using site-directed mutagenesis technique in genetic engineering, the sugar chain attached to the fourth amino acid in the protein (MHBs) of hepatitis B virus surface antigen was removed, or the sugar chain was transferred to the 6th or 7th amino acid in turn. To construct a nucleic acid vaccine for N-glycosylation removal and translocation, named Adr-dN4,Adr-N4-5,Adr-N4-6,Adr-N4-7., respectively. 293T cells were transiently transfected with the above nucleic acid vaccine, wild type MHBs nucleic acid vaccine (pSW3891/MHBs/Adr, for short, Adr) and unloaded pSW3891, respectively. The expression of MHBs was detected by Western blot. BALB/c mice were immunized with each group of vaccines at the 4th and 6th week after intramuscular injection. The anti HBs antibody in serum was detected by ELISA method, and the number of spleen cells secreting IFN- 纬 by surface antigen polypeptide of mice was detected by ELISPOT method. Results: Western blot showed that Adr,Adr-dN4,Adr-N4-5,Adr-N4-6,Adr-N4-7 could be expressed in 293T cells after transfection in vitro, and Adr,Adr-N4-5, was expressed in 293T cells. The results of ELISA and EISPOT showed that the terminal titer of anti-HBs and the number of spleen cells secreting IFN- 纬 by surface antigen in Adr immunized mice were slightly higher than those in other immunized mice. But compared with Adr-N4-5,Adr-N4-7, there was no statistical difference (P0.05), and there was significant statistical difference compared with Adr-dN4 and Adr-N4-6 (P0.05). Conclusion: the addition of N-ligand sugar chain at the 5th or 7th amino acids can repair or replace the function of Asn4 ligand sugar chain leading to the secretion of MHBs. It is very important to induce specific cellular and humoral immunity by secreting the HBs expression protein out of cells.
【作者单位】： 南京医科大学第一附属医院感染病科;美国马萨诸塞州大学医学院;
【基金】：江苏省兴卫工程重点学科基金(G:xk200715)
【分类号】：R392

【参考文献】

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