人记忆性T细胞的调控及调节性T细胞在骨髓微环境中作用的研究

发布时间：2019-02-18 12:00

【摘要】：第一部分EZH2通过Notch/Bcl-2信号转导途径调控人记忆性T细胞 [目的]研究EZH2在人记忆性T细胞调控过程中的作用以及其相应的调控机制。 [方法]用Ficoll密度梯度分离法从人外周血中提取CD3+T细胞,用抗CD3/CD28抗体在体外进行诱导增生。加入DZNep共培养以抑制T细胞上EZH2的表达,用含EZH2靶序列shRNA的慢病毒感染T细胞以从基因水平特异性的敲除T细胞EZH2的表达。用流式细胞仪来分析T细胞的表型和细胞因子分泌情况,用Annexin V和7-AAD染色来检测T细胞的凋亡情况,用BrdU和7-AAD染色来检测T细胞的细胞周期。用PCR来检测T细胞中基因表达情况。用蛋白印迹实验来检测T细胞上蛋白表达情况。用染色质免疫沉淀来检测EZH2在Notch抑制子启动子区域的调节情况。用小鼠黑色素瘤肺转移模型来验证EZH2对T细胞在体内抗肿瘤免疫中的作用。用免疫荧光染色来检测组织中T细胞上EZH2的表达。 [结果]人初生T细胞中EZH2表达有限,EZH2+T细胞有更高的增生潜能和更多的记忆性细胞特性。抑制T细胞上EZH2的表达能够导致T细胞增生受限和凋亡增加。抑制EZH2表达可以削弱T细胞的细胞因子分泌功能并且使其保护性抗肿瘤免疫功能受损。EZH2通过H3K27me3抑制Notch抑制子的表达,从而间接的调节Notch通路的信号转导,Notch转而通过Bcl-2调节T细胞的生存。溃疡性结肠炎患者组织中T细胞高表达EZH2,并具有较多的记忆性细胞特性。 [结论]内态自稳机体内T细胞上EZH2的表达水平有限,而在病理条件下T细胞上EZH2表达增高。EZH2调控人记忆性T细胞的增生、凋亡和细胞因子分泌功能,并且在T细胞介导的保护性抗肿瘤免疫过程中发挥着关键性的作用。Notch/Bcl信号转导通路在EZH2介导的记忆性T细胞调控过程中有着重要的作用。调节记忆性T细胞上EZH2的表达有可能为治疗自身免疫性疾病和肿瘤等人类疾病提供一种有效的治疗途径。 第二部分调节性T细胞在前列腺癌患者骨髓微环境中的作用 [目的]研究前列腺癌患者骨髓微环境中调节性T细胞的作用。 [方法]提取人外周血和骨髓吸取物,用流式分析免疫细胞的表型和细胞因子。分选CD4+CD25high T细胞来进行迁移实验,免疫抑制实验和与DC共培养以检测Treg细胞增生。用ELISA检测骨髓中CXCL12水平,用PCR检测基因表达情况。提取小鼠骨髓细胞并用RANKL,M-CSF或活化T细胞诱导破骨细胞分化。用骨密度扫描仪检测胫骨骨小梁的骨矿物质密度和内容物。用人前列腺癌小鼠嵌合模型和体内去除Treg细胞小鼠模型来检测体内Treg细胞在前列腺癌骨转移中的作用。 [结果]前列腺癌骨转移患者骨髓中Treg细胞水平明显增高,CXCR4/CXCL12信号通路有助于Treg细胞向骨髓迁移。骨髓中Treg细胞呈现活跃的细胞周期,骨髓中DC表达大量的RANK并能通过RANK/RANKL信号通路促进Treg细胞的增生。Treg细胞在体外抑制破骨细胞的分化。移植的Treg细胞迁移到骨髓并能增加小鼠胫骨骨小梁的骨矿物质密度和改善破骨细胞对骨小梁的破坏。体内去除Treg细胞则造成荷瘤小鼠胫骨骨小梁骨矿物质密度降低。 [结论]骨髓中Treg细胞可能形成一个免疫抑制的小生态环境从而有利于癌细胞发生骨转移并造成骨沉积这一前列腺癌骨转移患者主要的骨病理学变化。我们的结果从机制上阐述了Treg细胞集聚于骨髓中的原因并发现了一个Treg细胞在前列腺癌骨转移患者中的新作用。我们的发现预示着以Treg细胞为靶向的治疗不仅能改善机体的抗肿瘤免疫,而且有可能改善前列腺癌骨转移患者出现的骨病理学变化。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R392.1

【共引文献】

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本文编号：2425812